Подготовка эмбрионов данио-рерио и химические препараты для тестирования нервно-мышечной и общей токсичности на эмбрионах

Для начала соберите эмбрионы на стадиях расщепления, а именно от двухклеточной до восьмиклеточной стадии естественного нереста, в 10-сантиметровой чашке Петри. Удалите неоплодотворенные яйца, мусор и чешуйки из чашки Петри, чтобы очистить ее. Поместите 60 эмбрионов в одну чашку Петри, содержащую 15 миллилитров среды Е3.

Поместите всю посуду с эмбрионами в увлажненную камеру, приготовленную из пропитанных водой бумажных полотенец. Затем инкубируйте их через 72 часа после оплодотворения в инкубаторе, установленном при температуре 28,5 градусов по Цельсию. Затем достаньте нужные химические растворы из морозильной камеры при температуре минус 20 градусов по Цельсию и дайте им оттаять.

Приготовьте последовательное разведение каждого химического вещества в среде Е3 в стеклянной бутылке. Осмотрите раствор на наличие осадков, и если он присутствует, запишите его. Затем еще больше разбавьте до достижения следующей самой высокой концентрации.

Проверьте и повторяйте до тех пор, пока не исчезнут осадки. Затем проверьте и запишите рН экспозиционного раствора. Если он выходит за пределы диапазона рН от 7,0 до 8,5, отрегулируйте его до 7,4 с помощью соляной кислоты или гидроксида натрия.

Утилизируйте все неиспользованные среды воздействия в соответствии с местными правилами.