Протокол секционирования семян и метод матричного осаждения для анализа твердых семян пальмы методом MALDI-IMS

Для начала опустите три семени euterpe precatoria и три семени Euterpe edulis в деионизированную воду на 24 часа. Через 24 часа включите криостат, и дайте температуре достичь 20 градусов по Цельсию. Выньте влажные семена из воды и разрежьте их пополам с помощью лезвия микротома.

Приготовьте свежий, теплый, 10%-ный раствор желатина. Выложите половину семян на форму, и залейте ее желатиновым раствором. Заморозьте при температуре 20 градусов Цельсия в течение двух часов, прежде чем отнести его в криостат.

Прикрепите внедренное семя к подложке криостата с помощью компаунда оптимальной температуры резания или OCT и оставьте его на 10 минут внутри криостата для затвердевания OCT. Затем добавьте медную двустороннюю клейкую ленту на предметное стекло с покрытием из оксида индия или предметное стекло ITO. Изготовьте срезы толщиной 20 микрометров из каждого вида, и поместите их на клейкую ленту, приклеенную к стеклу ITO.

Для матричного осаждения поместите предметное стекло со срезами в вакуумный эксикатор до тех пор, пока оно не достигнет комнатной температуры. Сделайте учебные отметки с помощью корректирующего пера в каждом углу слайда и отсканируйте слайд с помощью настольного сканера. Используйте аналитические весы, чтобы взвесить 30 миллиграммов DHB.

Затем готовят раствор объемом в один миллилитр, содержащий равные части метанола и 0,1% трихлоруксусной кислоты, и растворяют в приготовленном растворе взвешенный ДГБ. Наполните стеклянный шприц объемом один миллилитр раствором DHB, и поместите его на шприцевой насос с расходом 0,8 миллилитра в час. С помощью трубки подсоедините шприц к игле для химической ионизации под атмосферным давлением или игле APCI, а затем подсоедините азот к игле.

Установите расход на 12,5 фунтов на квадратный дюйм. Прикрепите иглу APCI к подвижной платформе XY. Следите за тем, чтобы кончик иглы APCI находился на четыре сантиметра выше предметного стекла.

Используя программное обеспечение для рисования, настройте платформу движения XY на следование шаблону и подождите, пока платформа повторит шаблон 20 раз.