1 Для начала выполнитевизуализацию одномолекулярных конденсатов белка HaloTag в живых клетках 2. 3 Используя ImageJ, преобразуйте каждый канал 4 из файла необработанных данных визуализации 5 в независимый файл TIFF. 6 При необходимости запустите расческу предварительного отслеживания.
Отправьте текст 7 и следуйте подсказкам 8, чтобы заменить все кадры на самые свежие. 9 Чтобы загрузить одну молекулу файла фильма в SlimFast, нажмите 10 кликов на кнопку «Загрузить», а затем выберите стек изображений. 11 Установите параметры локализации 12 и приобретения в соответствующих листах опций.
13 Визуализируйте локализации всех молекул. 14 И, используя функцию блокировки всех, 15 генерируем файл, содержащий локализации 16 всех молекул в каждом кадре. 17 Затем перейдите к загрузке данных о частицах 18 и выберите SlimFast для загрузки файла 19 с настройками локализации и сбора.
20 Используя опцию и слежение за листом, 21 настройте параметры для построения траектории. 22 Нажмите на gen traj, чтобы создать файл 23, содержащий траектории всех молекул. 24 Загрузите отслеживаемый лист файла в eval SPT 25 и установите параметры 26 для фильтрации траекторий короче 2,5 секунд.
27 Используя данные экспорта, сгенерируйте файл 28 со всеми отфильтрованными траекториями. 29 Запуск макроса ImageJ, ядра, 30 и второй версии кластерной маски. text, 31 порог все кадры фильма получены 32 в канале JFX549 для создания замедленного видеоролика 33, заполненного двоичной маской 34 с выделением мест конденсации.
35 Использование конвертации ASCII медленного отслеживания CSS 3. М, 36 переформатируем траектории 37 и запустим категоризацию версии 4. М 38 сортировать их по времени жизни молекулы 39 в конденсате.
40 Далее, используя участок резиденции hist CSS. M, 41 извлекают наблюдаемую скорость диссоциации 42 специфически связанных молекул 43 и скорость фотообесцвечивания из представляющего интерес белка в конденсате 44 и траекторий H2B. 45 Наконец, рассчитайте скорректированное среднее время пребывания 46 интересующего белка, 47 специфически связанного с его конденсатами.
48 Кадр из двухцветного одномолекулярного фильма 49 TAF15 IDR-Halo-FTH1 показывает сигналы 50 от ядра в обоих каналах PA-JF646 и JFX549. 51 При сборке и сортировке 52 было обнаружено четкое различие траекторий 53 молекул, обнаруженных PA-JF646, связанных с конденсатами. 54 Рассчитанное среднее время пребывания 55 после коррекции на фотообесцвечивание 56 было больше для TAF15-Halo-FTH1, чем для Halo-TAF15.
