Для начала соберите фекальные гранулы от мышей, инокулированных фагом Escherichia coli mono, в стерильную предварительно взвешенную микроцентрифужную пробирку. Запишите окончательный вес пробирки и рассчитайте вес образца путем вычитания начального веса пробирки. Добавьте один миллилитр стерильного буфера SM в пробирку и встряхните на максимальной скорости, чтобы гомогенизировать фекальные гранулы.
Запишите объем буфера SM, добавленного к каждому образцу, для расчетов колониеобразующих единиц или КОЕ или ПФУ на грамм. Приготовьте серию из восьми последовательных разведений по 20 мкл каждого образца в 180 мкл буфера SM. Нанесите пять микролитров каждого разведения на пластину с агаром LB, содержащую E.coli, или только на пластины с агаром LB, чтобы определить концентрацию фага Т4 и E.coli.
Дайте каждому пятну высохнуть, прежде чем переворачивать пластины и инкубировать в течение ночи при температуре 37 градусов по Цельсию. На следующий день выберите разбавление от трех до 30 счетных бляшек на пятно. Подсчитайте и запишите количество использованных бляшек и разведений.
Разделите количество бляшек на объем, нанесенный в каждом месте, чтобы получить PFU на микролитр. Умножьте это значение на коэффициент разбавления и объем буфера SM, добавленный к каждому образцу для PFU на образец. Наконец, разделите на вес образца, чтобы получить PFU на грамм образца.
Уровни фага Т4 и E.coli, обнаруженные у мышей, которым вводили по два по 10 к шестому ПФЕ фага Т4 или лизата носителя, продемонстрировали сосуществование фага Т4 и E.Coli без истощения ни одной из популяций в течение четырех недель. Более низкие дозы фага Т4 не влияли на колонизацию по сравнению с двумя на 10 до шестого ПФЕ, и дозозависимого влияния на уровни E.coli не наблюдалось.
