Для начала перелейте 44 миллилитра базальной среды в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров. Добавьте в среду 5 миллилитров 10%ФБС. Затем пипетку по 0,5 миллилитра пенициллина, стрептомицина и амфотерицина В.
Центрифугируйте флакон, содержащий быстрый раствор декстрана, при температуре 1000 г в течение 30 секунд при температуре 20 градусов Цельсия. Добавьте во флакон 175 микролитров воды, чтобы получить конечную концентрацию 30 миллимолей на литр. Вращайте пробирку в течение 30 секунд на средней скорости, пока материал полностью не растворится.
Выдержите растворенный материал на льду в течение пяти минут. Центрифугируйте пробирку, прежде чем снова вихрять ее содержимое. Затем поместите тюбик на лед до дальнейшего использования.
Затем центрифугируйте сшивающий агент для концентрирования материала. Пипеткой 188 микролитров воды во флакон сшивающего агента для достижения конечной концентрации 20 миллимолей на литр тиоловых групп. Встряхивайте раствор сшивателя до тех пор, пока весь материал не растворится.
Центрифугируйте пробирку после инкубации. Затем ненадолго перемешайте, прежде чем поместить его при комнатной температуре до дальнейшего использования. Затем приготовьте суспензию стволовых клеток, полученную из жировой ткани, на 10 микролитров гидрогеля, как указано в таблице, для создания мастер-микса.
Перелейте девять микролитров мастер-смеси в лунку в полосовую пластину на 96 лунок. Через три минуты добавьте в смесь один микролитр разлагаемого сшивателя для затвердевания геля. Пипетка. 170 микролитров предварительно подогретых полных питательных сред над гидрогелями.
Заменяйте питательную среду после инкубации.
