Для начала настройте диодную лазерную систему на зеленую длину волны. Включите лазеры и дайте им прогреться в течение рекомендуемого времени. После того, как лазеры достигнут устойчивого состояния и стабилизируются, используйте измеритель мощности лазера для измерения выходной мощности лазеров.
Запишите значения мощности для каждой длины волны. После полной замены среды поместите луночную пластину, содержащую стволовые клетки, полученные из жировой ткани, встроенные в гидрогель, под диодную лазерную систему, облучайте гидрогели рассчитанным временем лазерного облучения для выбранной плавности на выбранной длине волны. Убедитесь, что каждая экспериментальная группа имеет необлученный контроль.
Инкубируйте культуральные планшеты при температуре 37 градусов Цельсия при добавлении 5% углекислого газа и влажности 85%. Далее раствор для восстановления ферментативных клеток разбавляют PBS в соотношении один к 20 для приготовления рабочего раствора. Добавьте 30 микролитров рабочего раствора в каждый гель или лунку, содержащую клетки, нуждающиеся в восстановлении.
Осторожно покачайте или покрутите пластину, чтобы обеспечить равномерное распределение раствора для восстановления. Инкубируйте планшет с восстановительным раствором в течение 45 минут. После инкубации осторожно извлеките планшет из инкубатора, центрифугируйте планшеты при 1,409G в течение пяти минут при температуре 20 градусов Цельсия, чтобы гранулировать клетки.
Далее осторожно выбросьте надосадочную жидкость, не потревожив клеточную гранулу. Пипетка 220 микролитров стерильного ПБС в гранулу. Обеспечьте тщательное перемешивание для получения однородной одноклеточной суспензии.
Стволовые клетки, полученные из жировой ткани, сохраняли округлую морфологию через 24 часа после посева и фотобиомодуляции. Клетки были разбросаны по всему гелю в виде одиночных клеток или в виноградоподобных кластерах. Морфология оставалась неизменной через 10 дней в 3D-культуре.
