Препарирование электрокомпетентных клеток для достижения экспрессии гена в одной копии в штамме бактерий с дефицитом эффлюкса

Для начала поместите все стерильные 1,5-миллилитровые пробирки для микрофуги и стерильные кюветы для электропорации на лед. Затем поставьте бутылку со стерильной водой, которая хранилась при температуре четыре градуса по Цельсию, на лед. Переложите 1,5 миллилитра бактериальной культуры на ночь в одну из 1,5-миллилитровых пробирок для микрофуг и центрифугируйте при 13 000 G в течение двух минут, чтобы гранулировать клетки.

С помощью пипетки объемом один миллилитр удалите всю надосадочную жидкость, не повредив гранулы клетки. Добавьте еще 1,5 миллилитра бактериальной культуры в ту же пробирку с микрофьюзой, центрифугируйте при 13 000 G в течение двух минут и удалите надосадочную жидкость. Добавьте один миллилитр ледяной стерильной воды в гранулу клетки и снова суспендируйте с помощью осторожного пипетирования до тех пор, пока гранула не перестанет оставаться на дне пробирки микрофуги.

Центрифугируют повторно взвешенные клетки при 13 000 G в течение двух минут и осторожно удаляют надосадочную жидкость с помощью пипетки объемом один миллилитр. Осторожно повторно суспендируйте конечную клеточную гранулу в 200 микролитрах ледяной стерильной воды и перелейте 100 микролитров окончательной клеточной суспензии во вторую ледяную пробирку с микрофугой объемом 1,5 миллилитра.