Забор мозговой ткани, криосекция и визуализация после стереотаксической хирургии у мышей

Для начала выпустите мышь, введенную бромфеноловым синим красителем, из стереотаксической рамки. После наркоза закрепите мышь на поролоновой доске с помощью скотча. Сделайте разрез на один-два миллиметра в придатке правого предсердия.

Введите инфузионную иглу в левый желудочек. Настаивается 20 миллилитров предварительно охлажденного физиологического раствора, затем 20 миллилитров замороженного 4%-ного раствора параформальдегида. Теперь сделайте разрез по средней линии от шеи к носу, чтобы снять кожу и обнажить череп.

Используйте щипцы или ножницы, чтобы очистить остаточную мышцу на черепе. Поместите кончик одного лезвия тонких ножниц между большим затылочным отверстием и мозгом острым краем, обращенным к кости, на ростральном конце среднесагиттального шва. Аккуратно сдвиньте и разрежьте черепную коробку вдоль среднесагиттального шва.

Используйте щипцы для удаления черепа, обнажая мозг. После включения ротационного микротома криостата установите температуру в камере на отметку минус 20 градусов по Цельсию. Налейте немного оптической температуры резки или компаунда OCT, чтобы равномерно покрыть поверхность диска образца.

Поместите диск для образцов в криокамеру и дайте ОКТ застыть. Прикрепите диск к головке образца. Затем поднесите лезвие ближе к блоку и обрежьте блок OCT, чтобы получилась плоская плоскость, параллельная диску.

С помощью бритвенного лезвия разрежьте мозг в корональном направлении в сторону от места инъекции, в форме для среза мозга. Поместите мозговую ткань, содержащую место инъекции, стороной разреза вниз на плоскую плоскость ОКТ. Налейте ОКТ на мозг и поместите диск в криокамеру, позволив блоку образца затвердеть.

Обрежьте блок образца до подхода к целевому участку и сделайте несколько срезов от уровня места инъекции. С помощью охлажденной маленькой кисти для письма соберите срезы коронального мозга в шестилуночную пластину, содержащую PBS комнатной температуры. С помощью щетки возьмите участки мозга с шестилуночной пластины и поместите их на предметное стекло.

После сушки визуально осмотрите вводимую область в отделах мозга.