Таргетная микроинъекция бромфенолового красителя мышам в область мозга

Начните с размещения стерильных хирургических инструментов на рабочем столе. Чтобы закрепить мышь под наркозом в стереотаксической рамке, смешайте верхние резцы с носовым зажимом и стабилизируйте голову двумя ушными планками. С помощью глазных ножниц сделайте разрез 0,5 сантиметра на коже головы, чтобы обнажить черепную коробку.

Ватным тампоном, смоченным в 3% перекиси водорода, потрите открытый череп, чтобы удалить надкостницу. Дайте черепной коробке высохнуть. Прикрепите дрель к стереотаксическому инструменту и отрегулируйте ручки стереотаксического рычага.

С помощью лупы расположите наконечник сверла точно на брегме. Запишите значение оси Z на брегме с помощью цифрового ЖК-дисплея. Теперь расположите наконечник сверла на лямбде и запишите значение оси Z.

Отрегулируйте носовой зажим, чтобы свести к минимуму разницу между двумя значениями Z. Расположите сверло в координатах минус 5,2 для X и плюс 0,8 для Y, чтобы измерить значение оси Z в дорсальном вентральном направлении. Переместите сверло в положение с координатами минус 5,2 для X минус 0,8 для Y и снова измерьте значение по оси Z.

Отрегулируйте ушные планки в соответствии с заданным масштабом. Установите сверло в положение брегмы и установите три координаты на цифровом ЖК-дисплее в ноль. Используя опорные координаты, расположите сверло над областью интереса.

Запустите дрель и постепенно опускайте ее с помощью вертикального рычага, пока дрель не войдет в черепную коробку. Удалите мусор и кровь с помощью ватных палочек. В пробирку объемом 200 микролитров добавить 200 микролитров загрузочного буфера SDS-PAGE, содержащего бромфеноловый синий и 50 микролитров воды двойной дистилляции.

Накройте черепное окно ватным диском, смоченным в физрастворе. Загрузите в микрошприц 0,3 микролитра красителя. Прикрепите шприц и моторизованный стереотаксический микроинъектор к стереотаксическому кронштейну.

Расположите наконечник шприца на брегме и установите координаты на ноль на цифровом ЖК-дисплее. В соответствии с опорными координатами настройте иглу в интересующую область. Установите скорость инжектора на 0,1 микролитра в минуту и запустите моторизованный микроинжектор, подавая 0,3 микролитра красителя в целевую область.

Через 10 минут медленно извлеките инжектор.