Инкапсуляция метаболической сети для рециркуляции АТФ и синтеза глицерина 3-P в везикулах субмикронного размера

Для начала пипеткой наберите 92,7 микролитра буфера А в пустую пробирку объемом 1,5 миллилитра. Затем добавьте DTT, АДФ натрия, хлорид магния, L-орнитин и ферменты. Аккуратно перемешав раствор, добавьте в него сверху 66,6 микролитров предварительно сформированных протеолипосом.

Мгновенно заморозьте смесь в жидком азоте, затем разморозьте ее на водяной ледяной бане при температуре примерно 10 градусов Цельсия. Пропустите инкапсуляционную смесь в экструдере 13 раз через фильтр, предварительно уравновешенный буфером А, DTT, ADP натрия и L-орнитином, и соберите экструдированный раствор в пробирку объемом 1,5 миллилитров. Для определения синтеза АТФ пипетка буферизует К, протеолипосомы и ионофоры в кювету из черного кварца с небольшим окошком.

Разогрейте образец до 30 градусов Цельсия в флуориметре. Теперь получите спектры возбуждения восприятия HR. Когда сигнал зонда будет постоянным, добавьте избыток L-аргинина и глицерина, чтобы запустить метаболическую сеть, и следите за реакцией с течением времени. Добавление L-аргинина к протеолипосомам приводило к резкому увеличению соотношения флуоресценции восприятия HR при возбуждении 500 и 430 нанометров.