Для начала вставьте нижнюю часть надрезанного наконечника для пипетки объемом 200 микролитров в предварительно изготовленное микрофлюидное улавливающее устройство. Пипеткой, с помощью шприца, оснащенного фильтром 0,2 микрометра, ввести 400 микролитров раствора бета-казеина во входной резервуар чипа. Центрифугируйте чип при 900 G в течение шести минут.
Теперь уровень жидкости должен быть одинаковым как на входе, так и на выходе. Нарисуйте контур распорки на двух предметных слайдах. Очистите предметные стекла плазмой с высоким содержанием кислорода в течение одной минуты, чтобы сделать их гидрофильными.
Добавьте низкотемпературную агарозу сверху на предметное стекло до полного покрытия агарозой. Затем наклоните предметное стекло под углом 90 градусов и слейте излишки агарозы на салфетку. Поместите предметные стекла при температуре 50 градусов Цельсия на 30 минут.
С помощью ручного зондового ультразвукового аппарата, оснащенного одномиллиметровым зондом, произведите ультразвуковую обработку подготовленных протеолипосом. Держите внедорожники proteo на льду в течение 30 секунд, прежде чем повторить ультразвуковую обработку пять раз. С помощью шприца объемом 100 микролитров нанесите 0,5 микролитра капель proteo SUV на приготовленный агарозный гель.
Используйте поток азота в течение примерно 10 минут, чтобы высушить капли. С помощью шприца и иглы наберите пипеткой набухающий раствор в подготовленную камеру через небольшое отверстие сбоку и дайте пузырькам набухнуть при температуре 22 градуса Цельсия в течение не менее 30 минут. Постучите камерой по твердой поверхности, чтобы собрать GUV из геля.
Чтобы захватить GUV для микроскопии, установите пассивированный микрофлюидный чип на микроскоп. После проверки на наличие дефектов подсоедините трубку изогнутой иглой к выходному отверстию резервуара. После подключения другого конца к одномиллилитровому шприцу установите шприц на насос с максимальной скоростью потока 10 микролитров в минуту.
Замените промывочный буфер резервуара на свежую среду. Промойте не менее чем 80 микролитрами буфера P. После удаления излишков буфера добавьте протео GUVs в резервуар. Контролируйте чип с течением времени, пока в нем не будет захвачено достаточное количество GUV.
Выведите излишки раствора GUV пипеткой. Затем добавьте в буфер для стирки P со скоростью расхода от 0,1 до одного микролитра в минуту. Наконец, локализуйте ловушки с достаточным количеством пузырьков.
После применения настроек к микроскопу добавьте в резервуар буфер R со скоростью потока 0,5 микролитра в минуту. Регидратация высушенных proteo LUV при низкой температуре гелеобразования агарозного геля привела к образованию везикул микрометрового размера. GUV были собраны и захвачены в микрофлюидном устройстве, пассивированном бета-казеином.
