Через месяц после воздействия LISW проведите патологоанатомическое обследование улитки мыши. Начинают гемоперфузию с раствором лактата Рингера, затем проводят транскардиальную перфузию с 4% параформальдегидом. После обезглавливания мыши удалите улитку и проткните непосредственно 4%-ным параформальдегидом при температуре четыре градуса Цельсия на ночь.
После получения полного изображения улитки с помощью программного обеспечения ImageJ рассчитайте карту частот улитки, чтобы точно локализовать конкретные области улитки на разных частотах. Используя приведенную формулу, рассчитайте выживаемость волосковых клеток на каждой частоте. После получения Z-стековых изображений внутренних волосковых клеток с высоким разрешением подсчитайте количество синапсов.
Визуализируйте окрашенные гематоксилином и эозином участки улитки и подсчитайте количество нейронов спирального ганглия в среднем повороте канала Розенталя, чтобы рассчитать выживаемость нейронов спирального ганглия в контрольной группе. По сравнению с контролем, флуоресцентное иммуноокрашивание показало неповрежденные структуры улитки без существенной потери волосковых клеток или нервных волокон во всех группах. Тем не менее, количественные оценки показали, что выживаемость наружных волосковых клеток была значительно ниже в группе с концентрацией 2,5 джоулей на квадратный сантиметр.
Между тем, выживаемость внутренних волосковых клеток была одинаковой между группами. Количество синаптических лент заметно снизилось в группах с более высокой частотой. Это сопровождалось снижением плотности нейронов спирального ганглия в группе 2,5 джоулей на квадратный сантиметр, что указывает на то, что кохлеарная дегенерация зависит от воздействия энергии LISW.
