Инокуляция опухолевых клеток у мышей с помощью точных методов ориентировки и инъекций

После обезболивания и удаления шерсти мыши положите ее на грелку, завернутую в автоклавный хирургический коврик. Аккуратно выпрямите тело и подтяните кожу вдоль позвоночника. С помощью хирургического маркера нарисуйте одну точку на одной стороне мыши в центре тентовой кожи.

После выращивания BXPC, трех клеточных линий рака поджелудочной железы человека в течение двух недель. Выньте колбу из инкубатора и поместите ее в шкаф биологической безопасности. Отсадите среду и промойте клетки пятью миллилитрами PBS.

Добавьте в колбу пять миллилитров агента для диссоциации клеток и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом в течение шести-семи минут. Перелейте клеточную суспензию в пробирку объемом 15 миллилитров и центрифугируйте при 500 G в течение пяти минут. После удаления надосадочной жидкости повторно суспендируйте клетки в полноценных питательных средах.

С помощью гемоцитометра определяют концентрацию клеток и общее количество клеток. Центрифугируйте 1,5-миллилитровую суспензию, содержащую 250 000 клеток на каждую мышь, для инокулирования при 500 G в течение пяти минут. После удаления надосадочной жидкости повторно суспендируйте гранулу в 10 микролитрах PBS на каждую инокулируемую мышь и поместите трубку на лед.

С помощью охлажденных наконечников для пипеток добавьте в пробирку растворимую базальную мембрану. Загрузите охлажденную иглу инсулина 29 калибра 20 микролитрами клеточной суспензии и положите шприц на лед. Введите иглу примерно на один сантиметр с няшки к ориентирующему пункту мыши и перемещайте иглу под кожу до тех пор, пока она не окажется на ориентире, скошенной стороной иглы вверх.

Введите 20 микролитров клеточной суспензии и подождите 45 секунд, прежде чем извлечь шприц. После извлечения мыши из наркоза подождите, пока она начнет передвигаться, прежде чем вернуться в свою домашнюю клетку.