Для начала наполните одномиллилитровый шприц 500 микролитрами непрерывной фазы. Прикрепите микротрубку из ПТФЭ к игле 27 калибра 0,75 дюйма. Установите узел на шприц, а затем на шприцевой насос.
Затем проделайте отверстие с помощью 0,75-миллиметрового биопсийного перфоратора в середине выреза PDMS. Протяните примерно три сантиметра трубки из ПТФЭ через отверстие в вырезе и вставьте узел в верхнюю часть наконечника для пипетки объемом 200 микролитров. Заклейте соединитель УФ-отверждаемым клеем на верхней части пипетки и прикрепите другую сторону трубки к игле 23 калибра 1,25 дюйма.
Далее наполните два шприца объемом один миллилитр 500 микролитрами легкого минерального масла. Прикрепите две иглы 23 калибра с помощью специальных насадок и установите их на шприцевой насос. С помощью программного обеспечения для управления шприцевым насосом аспирируйте функционализированные наночастицы и клеточный раствор в наконечник пипетки водных фаз.
После очистки подготовленной камеры наблюдения зажмите камеру в печатном держателе камеры, оснащенном двумя неодимовыми магнитами под углом 30 градусов. Теперь откройте оба порта и вставьте бумажное полотенце в верхний порт, чтобы впитать излишки внешней фазы во время наполнения. Подсоедините непрерывную фазу к верхнему входу микрофлюидного чипа.
Затем промойте чип непрерывной фазой в течение примерно 30 секунд со скоростью потока 1800 микролитров в час. Прикрепите наконечники пипеток водных растворов к двум средним входным отверстиям чипа. Запустите подачу водного раствора со скоростью 200 микролитров в час для каждого раствора.
Как только жидкость появится на выходе, начните подачу фторированной масляной фазы со скоростью 800 микролитров в час. Подождите, пока не установится стабильная выработка капель, о чем свидетельствует однородный серый, блестящий раствор на выходе. Затем подсоедините микротрубку из ПТФЭ к выходному отверстию для сбора капель.
С помощью обжимного модуля цельного фитинга, плотно прилегающего к пальцам, направьте их в камеру наблюдения. Как только камера будет заполнена, остановите поток и закройте порты заглушками, используя плотное давление пальцами. После образования капель промойте чип фторированным маслом, а затем азотом, чтобы удалить оставшуюся жидкость.
Установите держатель камеры на микроскоп с помощью луночного планшетного столика. Затем с помощью объектива 10x переключите микроскоп на светлопольный канал. Сосредоточьтесь на обездвиженных каплях в светлом поле и переместитесь к центру камеры.
Затем активируйте автоматическую систему фокусировки. Отрегулируйте плоскость измерения на канале светлого поля таким образом, чтобы края капель выглядели как острые черные круги, легко отличимые от масляной фазы и фона. Пройдитесь по каждому из флуоресцентных каналов, установив для них оптимальную плоскость измерения.
Для измерений перемещения сосредоточьтесь на агрегате наночастиц в каналах FITC, TRITC и Cyanine5.
