Подготовка 96-луночного планшета для монохромной мультиплексной количественной ПЦР (MMqPCR) для измерения длины теломер

Для начала поместите два 96-луночных планшета, загрузочный желоб и многоканальные наконечники для пипеток внутрь ПЦР-колпака. После нанесения этикеток на каждую пластину поверните пластину 1 на 180 градусов так, чтобы номера столбцов были перевернуты, при этом оставьте пластину 2 обращенной к технику. Затем насыпьте пятимиллилитровую пробирку приготовленной мастер-смеси MM qPCR в загрузочный корыт.

Используйте наконечник для дозатора, чтобы убедиться, что весь раствор из пробирки переведен. Прикрепите наконечники к многоканальной пипетке, надавливая на основание каждого наконечника, чтобы обеспечить плотное прилегание. Используя обратное пипетирование, сначала распределите основную смесь по всем четным или нечетным столбцам, чередуя две пластины.

После вортексования и центрифугирования ПЦР-полосок расположите их в штативе для пробирок в том порядке, в котором они будут размещены на планшетах. Теперь поверните обе пластины на 180 градусов так, чтобы номера столбцов поменялись местами по отношению к технику. Используйте многоканальную пипетку для ресуспендирования растворов в ПЦР-полосках.

Используя обратное пипетирование, заполните первые три столбца каждого планшета полоской А для ПЦР, чередуя четные или нечетные столбцы, как при размещении основной смеси. С помощью пипетки объемом 200 микролитров, установленной на 90 микролитров, тщательно суспендируйте седьмую стандартную пробирку для разведения в полоске для ПЦР S и заполните колонки с четвертой по шестую на пластинах. Наполнив пластины, аккуратно постучите ими по столешнице, чтобы жидкость в лунках осела на дне.

Затем накройте верхние части пластин герметизирующими пленками, прижимая кончиками пальцев все края пленки, чтобы обеспечить плотное прилегание. Чтобы перемешать содержимое тарелок, покрутите их на верхней части вытяжки в течение 30 секунд. Затем поместите запечатанные пластины в вращающуюся пластину на две минуты отверстиями лунки к центру.

Теперь поместите пластины в амплификатор, убедившись, что номера столбцов разборчивы. Очистите верхнюю часть каждой пластины чистой салфеткой, прежде чем закрывать верхнюю часть амплификатора. Затем нажмите кнопку «Запустить запуск» в программном обеспечении амплификатора для обеих машин.

При появлении запроса введите заголовок файлов анализа, который будет использоваться для маркировки и отслеживания данных этого эксперимента.