Для начала разложите на операционном столе все материалы, необходимые для операции на мышах. Положите мышь под наркозом на стол так, чтобы подушка находилась под ее шеей. Продезинфицируйте место операции, чередуя круговые тампоны бетадина или хлоргексидина и спирта три раза на одно дезинфицирующее средство.
Выполните щипнение пальцев ног, чтобы подтвердить глубину анестезии. С помощью хирургической ленты зафиксируйте передние конечности мыши. Под препарирующим микроскопом обратите внимание на вентральную поверхность шеи мыши и отрегулируйте увеличение, чтобы комфортно наблюдать за операционным участком.
Сделав продольный разрез по средней линии в один сантиметр, введите кончик закрытых ножниц в разрез и аккуратно раскройте его, чтобы выполнить тупое рассечение подкожной соединительной клетчатки, разделяя две слюнные железы. С помощью тонких щипцов аккуратно протяните правую слюнную железу через разрез, чтобы она упиралась в наружную поверхность, или используйте тупой крючок-ретрактор, чтобы втянуть слюнную железу в сторону. Продолжайте тупое рассечение соединительной ткани до тех пор, пока не станут видны грудино-ключично-сосцевидная и двужелудочная мышцы.
Используя щипцы с угловым концом, продолжайте осторожное рассечение соединительной ткани возле каудального конца мышечного треугольника, чтобы обнажить яремную вену, блуждающий нерв и общую сонную артерию (CCA). Продолжайте рассекать соединительную ткань вокруг ОСА от основания мышечного треугольника к подъязычной мышце. Используйте маленькие ватные шарики, чтобы остановить любое незначительное кровотечение и абсорбировать выделяемую жидкость из слюнных желез.
Рассеките соединительную ткань, чтобы отделить ОСА от блуждающего нерва, уделяя особое внимание минимизации обработки и повреждения блуждающего нерва. После мобилизации ОСА поместите на грудину односантиметровый кусок шва 6-0 и пропустите щипцы с наклонным концом под ОСА. С помощью щипцов с угловым концом в правой руке и тонких щипцов в левой руке проденьте шов к щипцам с наклонным концом и захватите ближе к концу шва.
Аккуратно протяните половину длины шва под ОСА. После наложения второго шва свободно завяжите каждый шов вокруг ОСА, не затягивая узлы и не ограничивая кровоток. С помощью щипцов с угловым концом осторожно удалите соединительную ткань на верхнем конце мышечного треугольника над подъязычной мышцей, чтобы локализовать ОСА и его разветвление в наружную сонную артерию и внутреннюю сонную артерию.
Затем наложите кусок шва на грудину и тщательно очистите соединительную ткань со всех сторон наружной сонной артерии в районе раздвоения. Проведите щипцы с наклонным концом под наружную сонную артерию. С тонкими щипцами в левой руке проденьте шов на щипцы с угловым концом в пространстве между внутренней и наружной сонной артерией и осторожно оттяните половину длины шва.
Неплотно завяжите шов вокруг наружной сонной артерии, не затягивая узел. Чтобы подготовить изогнутую иглу, держите полудюймовую иглу 33-го калибра скосом вверх. Возьмитесь за кончик иглы стерильным игловодителем и согните его примерно на 30-40 градусов в сторону скоса.
Затяните узел шва вокруг наружной сонной артерии. Затем сдвиньте нижний шов на CCA по направлению к грудино-ключично-сосцевидной мышце как можно дальше и затяните узел. Поместите ватный тампон на край полости, чтобы впитать выделяемую жидкость и кровь во время инъекции.
Держа шприц в правой руке и тонкие щипцы в левой руке, подведите иглу к артерии непосредственно над нижним швом на ОСА. С помощью тонких щипцов осторожно потяните свободный конец нижнего шва в каудальном направлении, чтобы обеспечить низкий уровень натяжения CCA. Введите иглу в CCA сразу за скосом и медленно ослабьте натяжение шва.
Левой рукой нажмите на поршень шприца, чтобы медленно ввести раствор, содержащий вещество, представляющее интерес или контроль. Затем захватите слабо завязанный верхний шов на CCA тонкими щипцами и приподнимите, чтобы перевернуть артерию. Извлеките иглу и отложите шприц в сторону.
С помощью щипцов с угловым концом в правой руке сохраните излом в артерии и затяните узел в верхнем шве на CCA. С помощью ватных шариков впитайте остатки крови в операционную полость. Найдите место инъекции на CCA и определите количество швов, необходимых для закрытия.
Тщательно орошите место инъекции и просвет изолированного участка ОСА стерильным физиологическим раствором для удаления свернувшейся крови. С помощью щипцов с наклонным концом возьмитесь за иглу шовного материала 9-0 близко к сточным водам. Удерживайте артерию и аккуратно прижмите стороны CCA вместе с помощью тонких щипцов.
Затем проведите иглу и наложите шов через обе стороны артерии одним укусом. Чтобы закрыть место разреза хирургическим узлом, выполните связывание инструмента тонкими щипцами и щипцами с наклонным концом, используя минимум четыре приема. С помощью тонких щипцов развяжите и снимите шов вокруг наружной сонной артерии, а затем наложите верхний шов на CCA для восстановления кровообращения.
Медленно ослабьте нижний шов на КЦА, но не стоит сразу его развязывать. Убедившись, что место инъекции достаточно закрыто, снимите верхний и нижний швы CCA. Переместите слюнную железу в полость и, используя стерильный компресс, закройте разрез одним швом, накладываемым через каждые три-четыре миллиметра.
После внутрикаротидного введения меченых GFP мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека, иммуногистохимия срезов мозга выявила наличие GFP-положительных клеток, что указывает на хоуминг мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека в глиомы. Существенной разницы в эффективности хоуминга мезенхимальных стволовых клеток человека GFP между процедурами лигирования ОСА и репарации ОСА не наблюдалось. Дисперсия мезенхимальных стволовых клеток человека GFP в опухоли не выявила существенной разницы между медианным количеством GFP-положительных клеток в мощных полях между группами лигирования CCA и репарации CCA.
