Экстракция ДНК из образцов мокроты человека для быстрого обнаружения бактериальных патогенов с помощью микрофлюидного чипа

Для начала очистите ротовую полость и зубы чистой водой. Попросите пациентов с зубными протезами снять их. Проинструктируйте пациента сильно кашлять, чтобы вывести глубокую дыхательную мокроту в контейнер для мокроты.

Чтобы извлечь ДНК, добавьте в образец соответствующий объем 10% гидроксида натрия в зависимости от его вязкости. Ввергните суспензию в течение 15 секунд, затем инкубируйте ее при температуре 37 градусов Цельсия в течение 30 минут, чтобы образец разжижался. Затем пипеткой нанесите один миллилитр разжиженного образца в центрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитра.

Центрифугируйте образец при 15 777 G в течение пяти минут при температуре от двух до шести градусов Цельсия. Затем выведите надосадочную жидкость из пипетки, чтобы сбросить ее. Теперь добавьте один миллилитр моющего раствора в трубку и сделайте его вихревым движением, чтобы поднять осадок со дна трубки.

После центрирования и отбрасывания надосадочной жидкости, как и раньше, пипеткой нанесите на поддон 100 микролитров раствора для экстракции нуклеиновых кислот. С помощью пипетки отсадите и тщательно перемешайте осадок с раствором. Перелейте жидкость и осадок вместе в пробирку для экстракции нуклеиновых кислот.

Поместите трубку в вихревой миксер на средней скорости на пять минут. Затем перенесите трубку в металлическую ванну при постоянной температуре 100 градусов Цельсия на пять минут. Наконец, центрифугируйте образцы при температуре 15 777 G в течение пяти минут при температуре от двух до шести градусов Цельсия перед дальнейшими экспериментами.