Для начала прополощите удаленный зуб стерильным физиологическим раствором, чтобы удалить кровь. Осторожно разрежьте зуб в продольном направлении на две части с помощью твердосплавного жернова для фиссуры во время орошения стерильным физиологическим раствором. После этого транспортируйте зуб и его неповрежденную пульпу в стерильной среде альфа-МЕМ на льду в лабораторию клеточных и тканевых культур.
Затем поместите извлеченный образец зуба в стерильную культуру в чашку Петри и тщательно промойте три-четыре раза стерильным ПБС. С помощью острого экскаватора и щипцов аккуратно удалите полость пульпы из ткани и тщательно очистите ее стерильным ПБС для удаления следов крови. Теперь разделите поверхность посуды на четыре части, положив в каждую часть от 1 до 2 миллилитров стерильного PBS.
Поместите образец ткани пульпы в одну область и разрежьте его на небольшие кусочки с помощью хирургического лезвия. Перенесите кусочки ткани, поднимая их в последовательные области с помощью PBS. Между тем, добавьте примерно от 0,8 до 1 миллилитра альфа-MEM, содержащего заменимые аминокислоты, с 10% FBS и коктейль антибиотиков в шестилуночную тарелку.
И перемещайте его, чтобы СМИ распространялись равномерно. Показаны различные стадии развития первичной культуры стволовых клеток пульпы зуба. На второй день посева наблюдались округлые клетки пузырькового типа из зубной ткани.
Беспорядочная сеть клеток, выходящих из ткани, наблюдалась на четвертый день. Однако к 13-му дню количество клеток, появившихся из экспланта, увеличилось. И к концу второй недели большинство эксплантов оказались окружены множеством адгезивных клеток с веретенообразной морфологией.
