Трансплантация человеческих клеток SC-NES в органотипические срезы для валидации терапии регенерации спинного мозга

Чтобы приготовить стеклянную микроиглу, поместите капилляры из боросиликатного стекла в полярное гнездо. После установки необходимых параметров нажмите кнопку pull, чтобы сгенерировать иглу. Затем разделите GFP-положительные стволовые клетки в пробирку.

После подсчета и гранулирования повторно суспендируйте их в нужной концентрации. Переложите клеточную суспензию в пробирку объемом 1,5 миллилитра и поместите ее на лед для трансплантации. С помощью микропипетки загрузите четыре микролитра клеточной суспензии в стеклянную микроиглу.

Вставьте иглу в предназначенную для этого опору на микроинъекторе и с помощью прямого пинцета сломайте кончик иглы. Установите давление на 10 фунтов на квадратный дюйм. С помощью пипетки Пастера нанесите каплю минерального масла на калиброванное предметное стекло и введите микросуспензию клеток в каплю, чтобы отметить диаметр для калибровки объема инъекции.

После набора правильного объема быстро введите клеточную суспензию в срез. Под флуоресцентным стереомикроскопом проверьте наличие клеток в срезах и инкубируйте их при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом.