SW1222 Производство органоидов колоректального рака на основе клеточной линии в ультракороткой самоорганизующейся пептидной матрице

Для начала пипеткой нанесите 10 микролитров капель 2Х пептидного раствора в центры лунок в 24-луночной пластине. После инкубации внесите пипеткой по 10 микролитров 2X PBS в каждую лунку. С помощью кончика пипетки аккуратно перемешайте раствор, дайте каплям геля стабилизироваться не менее 20 минут, следя за тем, чтобы капли остались неповрежденными.

Затем пипетку 2,5 мл 0,0125% трипсина ЭДТА в колбу, содержащую 2 миллиона клеток колоректальной аденокарциномы человека SW1222. Инкубируйте клетки с трипсином при температуре 37 градусов Цельсия в течение пяти-10 минут, пока они не отсоединятся от колбы. Добавьте пять миллилитров готовой среды, чтобы инактивировать трипсин.

Затем отфильтровать клеточную суспензию с помощью клеточного фильтра 30 микрометров. С помощью микропипетки объемом 10 микролитров введите по два микролитра клеточной суспензии в каждую пептидную каплю. Посадите 800 клеток клеточной линии SW1222 в каждую лунку на четыре дня.

Инкубируйте капли в течение 30 минут при температуре 37 градусов Цельсия при углекислом газе 5%. Затем в каждую лунку добавьте по 0,5 миллилитра дополненной среды. Для приготовления средства контроля разбавьте запас матрицы контроля базальной мембраны с добавленной средой.

Загрузите клеточную суспензию в разбавленный мембранный базовый раствор. Пипеткой внесите 20 микролитров разведенной матрицы базальной мембраны в каждую лунку с клетками. Инкубируйте клетки в течение 20 минут при температуре 37 градусов Цельсия.

После того как капли застынут, добавьте 0,5 миллилитра готовой среды. Визуализируйте клетки с помощью светлопольного микроскопа в первый, четвертый и седьмой дни, чтобы оценить рост органоидов. Через неделю светлая визуализация клеток показала, что мелкие клеточные кластеры собирались в органоиды.

Органоиды, полученные из SW1222, культивируемые в пептидных гидрогелях, имели круглую морфологию со светлым видом. Более темный вид указывал на нежелательную более высокую плотность, наблюдаемую в колониях пептида P на седьмой день.