Для начала гомогенизированный куриный дижеств собирают из экстрагированной куриной кишки на вихре в течение 10-15 секунд. Перенесите гомогенизированный образец в пробирку с обогащающей средой. После инкубации с помощью вихревого миксера тщательно перемешайте обогащенную пробирку в течение 10–15 секунд.
Затем переложите перемешанный образец в стерильную минимальную среду бульона перед инкубацией, как и раньше. Затем последовательно разводят образцы в стерильном физиологическом растворе, начиная с разведения от одного до 10 и продолжая до разведения от одного до 1000. Тщательно гомогенизируйте образец на вихревом смесителе после каждого разбавления.
Переложите один миллилитр разведенного образца в чашку Петри в стерильных и анаэробных условиях. Затем в чашку Петри налейте от 15 до 20 миллилитров растопленной среды минимального агара. Осторожно поворачивайте блюдо, чтобы обеспечить равномерное перемешивание.
Когда агар застынет, инкубируйте посуду в перевернутом положении в анаэробной станции в течение 24 часов. при 39 градусах по Цельсию. В конце инкубации колонии должны выглядеть как отчетливые маленькие точки.
Теперь используйте стерильную петлю инокуляции, чтобы тщательно отобрать каждую отдельную бактериальную колонию. Переложите колонии в отдельные пробирки, содержащие пять миллилитров минимального отвара среды. Повышенное помутнение в конце инкубации свидетельствует о росте бактерий.
Колонии бактерий, способные использовать мио-инозитол, наблюдались на среде с минимальным содержанием агара.
