Забор и посев эндотелиальных клеток пупочной вены человека (HUVECs) для модели кишечника на чипе человека

Для начала приготовьте 1 к 100 разведению коллагенового стокового раствора в DPBS с магнием и кальцием. Добавьте в соответствующую камеру 350 микролитров разбавленного исходного раствора, и выдержите в течение пяти минут при комнатной температуре. Промойте все камеры два раза, используя 350 микролитров DPBS с магнием и кальцием, чтобы вымыть остатки коллагена и уксусной кислоты.

Выньте вилки из одного места и переключите их на другую сторону. После повторной промывки камеры добавьте в нее 350 микролитров среды для роста эндотелиальных клеток. Выньте вилки из одного места и переключите их на другую сторону.

Затем добавьте в каждую камеру по 350 микролитров среды для роста эндотелиальных клеток. Принимайте HUVECs, культивируемые в проходах с первого по третий с 80% до 90% слиянием клеток в среде для роста эндотелиальных клеток. Затем извлеките питательную среду из колбы для клеточных культур T25 и аккуратно промойте клетки тремя-пятью миллилитрами DPBS без магния и кальция.

После того, как раствор будет удален, добавьте один миллилитр реагента для диссоциации трипсина и инкубируйте в течение пяти минут при температуре 37 градусов Цельсия, пока клетки не отделятся от колбы. Перенесите отделенные клетки в пробирку, используя девять миллилитров 5% FBS в PBS без магния и кальция. Центрифугируйте при 350G в течение пяти минут при комнатной температуре.

После перемещения надосадочной жидкости повторно суспендируйте клеточную гранулу в одном миллилитре среды для роста эндотелиальных клеток. Добавьте соответствующий объем клеток в камеру и инкубируйте биочипы во влажном инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа. Проведите замену среды, содержащей HUVECs, в камере с 350 микролитрами среды для роста эндотелиальных клеток через 24 часа.

Если в микрофлюидных биочипах появились пузырьки воздуха, закройте все порты биочипа, кроме портов пораженной камеры. Наклоните чип, чтобы переместить пузырь воздуха близко к одному концу полости. Из порта другого конца протолкните 700 микролитров среды для клеточных культур через камеру, удерживая противоположные пробки.