Эксперименты по эволюции температуры с использованием Sulfolobus acidocldarius

Для начала используйте возрожденные предковые популяции Sulfolobus acidocaldarius. Добавьте BBM plus, чтобы разбавить культуры до OD600 0,01. Пипетка соответствующего объема из каждой из семи культур в три отдельные проколотые двухмиллилитровые пробирки.

Запечатайте трубки дышащей мембраной, затем поместите каждый набор из семи популяций предков в отдельные термомиксеры. Установите каждый термомиксер на необходимую температуру и 400 об/мин, чтобы начать эволюционный эксперимент. Через 48 часов переведите по 15 микролитров каждой из культур трансферного нуля в 1,5 миллилитра подогретого BBM плюс среда, содержащаяся в проколотой двухмиллилитровой пробирке с маркировкой transfer one.

Запечатайте пробирки проницаемой мембраной, прежде чем поместить их обратно в случайные положения в соответствующие термомиксеры. Измерьте OD600 нуля переноса в пластинчатом спектрофотометре, чтобы завершить первый перенос. Повторяйте перенос культуры и измерение оптической плотности каждые два дня для выполнения переносов до тех пор, пока не будет достигнуто желаемое количество переносов.

Запасы глицерина популяций подготавливают после каждого 10-го переноса и при окончательном переносе и маркируют пробирку идентификатором предковой популяции и номером переноса. Термомиксеры должны быть настроены на постоянную температуру 75 градусов по Цельсию и 65 градусов по Цельсию. Третий термомиксер будет постепенно уменьшаться, чтобы наблюдать за реакцией на постепенное изменение.