Облучение и обработка опухолевых органоидов пациента для оценки радиочувствительности с использованием визуализации в реальном времени

Для начала получите органоид опухоли пациента или PDTO и добавляйте три миллилитра свежей обогащенной питательной среды DMEM F/12 в PDTO каждые три-четыре дня. С помощью облучателя на исследовательской радиационной платформе для мелких животных облучают купола, содержащие PDTO, в режиме открытого поля. Сразу после облучения каждый ФДТО, содержащий купол Нагригеля, промыть двумя миллилитрами обогащенной среды DMEM F/12.

Затем с помощью P 1000 ресуспендировать PDTO в одном-трех миллилитрах коммерчески полученного рекомбинантного фермента. Переложите клеточную суспензию в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров и инкубируйте в течение пяти минут при температуре 37 градусов Цельсия. Центрифугируйте пробирку, чтобы гранулировать клетки и аспирировать надосадочную жидкость, чтобы в пробирке осталось примерно один миллилитр рекомбинантного фермента.

Затем промойте клетки обогащенной средой DMEM F/12 и отфильтруйте клеточную суспензию в фильтре с ячейками ячейки 40 микрометров для удаления клеточных кластеров, окрасьте небольшую выборку отфильтрованных клеток 10% трипиновым синим в PBS и подсчитайте их в автоматическом счетчике клеток. Ресуспендируйте клетки до достижения плотности 800 клеток в 50 микролитрах обогащенной среды с 66% магригеля. Далее планшет, каждый купол помещают в отдельные лунки совместимого с изображениями 48-луночного культивального планшета и инкубируют планшет, чтобы дать магригелю застыть.

Наконец, добавьте от 0,5 до одного миллилитра обогащенной среды DMEM F/12 в каждую лунку для визуализации в реальном времени.