Забор сыворотки из плода мыши для изучения нейроразвития при нейрофиброматозе 1 типа

Приступайте к забору фетальной сыворотки из фетального мешка, ранее изолированного от матери. С помощью щипцов номер пять тщательно рассекают фетальный мешок, чтобы извлечь плод для сбора сыворотки. С помощью изогнутых щипцов перенесите плод в посуду, содержащую свежий, холодный, стерильный ПБС.

Аккуратно промокните плод на бумажном полотенце, чтобы удалить остатки околоплодных вод и PBS из образца. Держите плод за живот. Частично обезглавьте плод микроножницами, сделав разрез на брюшной шейке.

Убедитесь, что кровеносные сосуды перерезаны, но кожа, удерживающая голову, все еще прикреплена. Держите тело под углом 45 градусов разрезом вниз. Держите миниветту или капиллярную трубку объемом 50 микролитров параллельно месту разреза, где кровь образует каплю.

Осторожно дайте капиллярной трубке наполниться кровью. Поместите голову в свежую 60-миллиметровую посуду, содержащую холодный стерильный PBS для дальнейшего сбора тканей. После того, как кровь будет собрана в капиллярной трубке, быстро вдавите поршень в 1,5-миллилитровую трубку.

Прокрутите, постучайте или быстро поверните трубку, чтобы убедиться, что кровь находится на дне. Центрифугируйте образцы крови при температуре 4 градуса Цельсия и 16 000 G. Используя пипетку объемом 200 микролитров, переложите сыворотку в свежие пробирки объемом 500 микролитров, не нарушая палитру клеток крови на дне пробирки.