Забор мозга у плода мыши для изучения нейроразвития при нейрофиброматозе 1 типа

Приступайте к сбору мозга с ранее выделенной головки плода под препарирующим микроскопом. С помощью изогнутых щипцов придерживайте рыло и с помощью щипцов номер пять осторожно снимите кожу с черепной крышки, удерживая ее прикрепленной к рыле для удобства удержания. Держа под углом около 75 градусов относительно мозга, проведите щипцами по средней линии до появления прозрачной мембраны развивающихся частей черепа в каждую сторону.

Сдвиньте щипцы параллельно черепной коробке, вставьте его под черепную крышку, сожмите и отклейте в одну сторону. После того, как одна сторона будет удалена, обхватите оставшуюся сторону щипцами и отклейте на другую сторону. С помощью микроложки аккуратно вычерпните мозг из черепа.

Перенесите мозг в свежую 60-миллиметровую посуду, содержащую холодный PBS. С помощью изогнутых щипцов удерживайте мозг на стыке заднего и переднего мозга недоминантной рукой. Доминирующей рукой держите скальпель лезвием параллельно поверхности мозга.

Затем сильно надавите на среднюю корковую область. Все еще удерживая задний мозг, сделайте второй разрез перед задним мозгом, чтобы отделить его от переднего мозга. В среднем отделе ищите небольшое линейное пространство на вентральной поверхности, которое является третьим желудочком.

С помощью щипцов номер пять осторожно отщипните слизистую оболочку с обеих сторон поверхности желудочка, затем перенесите ее в свежую, чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитров. Быстро поместите пробирку в криобезопасную емкость с жидким азотом.