Для начала центрифугируйте коагулирующие кровьсодержащие пробирки при температуре от 626 до 1,409 G в течение 20 минут при температуре от двух до восьми градусов Цельсия. Затем аккуратно соберите надосадочную жидкость в новую пробирку. Храните надосадочную жидкость при температуре минус 80 градусов Цельсия.
Далее устанавливаем заготовку стандартной и пробной лунок. Пипеткой внесите 50 микролитров разведенных стандартов в пластину для ИФА. Затем перелейте 40 микролитров разведенных проб в лунки для проб.
Добавьте 10 микролитров сыворотки в лунки для образца. Теперь запечатайте пластину герметизирующей пленкой. Поместите герметичную тарелку в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия на 30 минут.
Разбавьте концентрированный раствор в 30 раз дистиллированной водой до получения одноконцентрированного промывочного раствора. Далее снимите с пластины уплотнительную пленку и выбросьте жидкость. Теперь заполните каждую лунку 200 микролитрами моющего раствора пять раз.
После того, как надосадочная жидкость будет выброшена в последний раз, просткните пластину насухо. Пипеткой внесите 50 микролитров ферментного реагента во все лунки, кроме пустых. Затем запечатайте пластину герметизирующей пленкой перед помещением ее в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия на 30 минут.
Промыв тарелку еще пять раз, добавьте по 50 микролитров каждого из проявителей цвета, А и В. Аккуратно встряхните тарелку, чтобы хорошо перемешать. Затем инкубируйте тарелку при температуре 37 градусов Цельсия при слабом освещении в течение 10 минут. Теперь внесите пипеткой по 50 микролитров стоп-раствора в каждую лунку, чтобы завершить реакцию.
Измерьте поглощение каждой лунки последовательно на 450 нанометрах. Концентрация гомоцистеина в плазме крови в группе метионина была в два раза выше, чем в контрольной группе. Концентрации гомоцистеина в плазме крови были относительно ниже в группах лечения.
