Создание 3D многоклеточных сфероидов из клеток A549-iRFP для инокуляции опухолей

Для начала установите трехмерные многоклеточные сфероиды или MCS из аденокарциномы легкого человека или клеток A549 iRFP. Засейте клетки в 96 лунок со сверхнизким уровнем прикрепления круглого дна и микропластину, используя 100 микролитров полной питательной среды с добавлением 0,3% коллагена. Центрифугируйте микропланшеты при 300 G в течение семи минут при четырех градусах Цельсия, чтобы облегчить образование MCS.

После центрифугирования изучите морфологию сфероида под микроскопом, чтобы убедиться в агрегации клеток. Заменяйте 100 микролитров питательной среды в каждой лунке свежей полной питательной средой через день. Наблюдая под микроскопом, выбирайте сфероиды с круглой формой и в целом гладкими краями, но с пятью-10 шероховатыми бутонами и подходящим диаметром.

Измерьте флуоресценцию iRFP, чтобы выбрать MCS с флуоресцентными сигналами в пределах одного стандартного отклонения от среднего.