Начните хирургическую процедуру на мыши, находящейся под наркозом, с подкожного введения бупренорфина гидрохлорида для уменьшения боли. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость. Поместите мышь в спинную позу и зафиксируйте конечности в растягивающем положении с помощью лент.
Продезинфицируйте кожу спины с помощью чередующихся тампонов йода и спирта, не менее трех раз каждый. Далее с помощью хирургических ножниц вырежьте разрез от 0,5 до одного сантиметра на левой задней стороне животного. Осторожно используйте щипцы для разделения мышечной и жировой тканей до тех пор, пока не станут видны стенки грудной клетки и движения легких.
С помощью пипетки перенесите один выбранный многоклеточный стероид (MCS) из микропланшета в стеклянную чашку Петри, содержащую ледяной PBS. Прикрепите иглу 20-го калибра к стеклянному шприцу объемом 100 микролитров и предварительно охладите их на льду. Затем наберите 20 микролитров предварительно охлажденной смеси PBS и Matrigel.
С помощью шприца необходимо быстро отсасывать один МКС из чашки Петри в минимальном объеме смеси ПБС-Матригель, удерживая сфероид в металлической части иглы. Аккуратно введите иглу вертикально между двумя реберными костями на глубину примерно трех миллиметров и медленно введите все 20 микролитров смеси, содержащей аспирированный MCS. Затем аккуратно извлеките иглу.
Нанесите на рану тройную мазь с антибиотиком. Запечатайте разрез хирургическими зажимами, которые будут удалены через две недели. Поместите животное на инфракрасную грелку и накройте ее лабораторными салфетками для поддержания температуры тела.
Наблюдайте за животным не менее 30-60 минут, пока оно не проснется и не начнет правильно двигаться. Используя систему визуализации небольших животных с 700-нанометровым каналом, измеряйте флуоресцентный сигнал IRFP от ксенотрансплантата опухоли мыши, находящейся под наркозом, каждые три-четыре дня. Измерьте флуоресценцию в четырех положениях: левой, правой, дорсальной и вентральной.
Чистая интенсивность флуоресценции как с левой, так и с вентральной стороны показала сходную тенденцию прогрессирования опухоли, при этом флуоресценция с вентральной стороны росла немного медленнее, чем флуоресценция с левой стороны.
