Экстракция и электропорация сердца эмбриона мыши как подход к трансгенезу

Для начала используйте пуллер для дозатора, чтобы растянуть стеклянный капилляр шириной 20 микрометров. Выложите извлеченную мышиную матку на сухое бумажное полотенце. Затем вставьте кончик тонких ножниц в миометральную сторону матки и медленно проведите краем лезвия по всей длине и разрежьте его.

Теперь обнажаем и вырезаем децидуи. Переложите их в посуду со средой для роста. Препарируйте децидуи, чтобы извлечь эмбрионы.

Перенесите эмбрионы в 60-миллиметровую чашку Петри, содержащую теплую питательную среду. С помощью пары тонких щипцов аккуратно разрежьте хвост и головку эмбриона, оставив только туловище тела. Аккуратно удалите как можно больше ткани из туловища, не повреждая сердце или легочные артерии и артерии аорты.

Вставьте новую вытянутую иглу в кончик ротовой пипетки, а затем тщательно отасуньте и загрузите в вытянутую иглу 10 микролитров приготовленной плазмидной смеси. Поместите одно сердце в чистую 60-миллиметровую чашку Петри, содержащую предварительно подогретый PBS. Поместите чашку под препарирующий микроскоп.

Отрегулируйте расстояние между полюсами положительных и отрицательных электродов примерно до четырех миллиметров. Далее с помощью игольчатой пипетки во рту аккуратно проколите самый поверхностный слой сердца. Перенесите один-два микролитра плазмидной смеси в сердце.

Осторожно извлеките иглу. Удерживайте электрод на месте так, чтобы сердце находилось между обоими полюсами. Затем произведите электропорацию сердца.

Переложите электропорированное сердце на новую 12-луночную пластину, содержащую один миллилитр питательной среды. Инкубируйте планшет при температуре 37 градусов Цельсия под 5% углекислым газом до анализа.