Электропорированная изоляция сердечных клеток мышей для сортировки и анализа клеток

Для начала получите сердца мышей с электроприводом, извлеченные из мышей дикого типа CD1, через 12-12,5 дней после скрещивания. Переложите сердце в трубку, содержащую один миллилитр ледяной среды для пищеварения. С помощью шприца несколько раз слегка надавите на сердце, чтобы измельчить его.

Инкубируйте измельченную ткань на горячей плите при температуре 37 градусов Цельсия в течение 45 минут со скоростью 600 оборотов в минуту. Затем отфильтруйте смесь для сбраживания через клеточное сетчатое фильтр 70 микрометров в новую пробирку. Затем снова отфильтруйте проходной объем с помощью клеточного фильтра 40 микрометров в новую 50-миллилитровую пробирку.

Пипеткой внесите 500 микролитров FBS в фильтрат. Восполните объем до 30 миллилитров холодным DMEM. Центрифугируйте суспензию при 240G в течение 10 минут при комнатной температуре.

Выбросьте надосадочную жидкость. Затем положите трубку вверх дном на бумажное полотенце для полного высыхания. Для сортировки клеток ресуспендируйте клетки в 300 микролитрах сортировочного буфера.

Наконец, добавьте 0,3 микролитра DAPI и выполните сортировку клеток. Сердца бились и казались в хорошем состоянии через 24 часа после электропорации. Миокард и эпикард не показали никаких признаков апоптоза.

Анализ флуоресцентной активности показал мозаичный сигнал GFP почти во всех четырех камерах сердца.