Высокопроизводительная генерация многоклеточных сфероидов из линии раковых клеток человека для 3D-визуализации в реальном времени

Чтобы отлить 3D чашки Петри, промойте микроформы в дистиллированной воде и поместите их в автоклавируемый контейнер для автоклавирования. Добавьте 0,9% стерильного физиологического раствора в автоклавный порошок агарозы в стеклянный флакон объемом 200 миллилитров. Неплотно закрутите крышку, чтобы избежать повышения давления, и поворачивайте бутылку, чтобы смешать порошок агарозы.

Отварите порошок агарозы в микроволновой печи с прерывистым встряхиванием. Как только раствор агарозы остынет, поместите расплавленную агарозу пипеткой в микроформу и подождите, пока он застынет. После этого осторожно согните микроформу, чтобы извлечь 3D-чашку Петри и перенести ее на 12-луночный планшет для культуры тканей.

Чтобы сбалансировать 3D-чашку Петри, добавьте 2,5 миллилитра среды McCoy's 5A на лунку и выдерживайте в течение 15 минут при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа. После окончательного уравновешивания полностью удалите всю питательную среду вокруг 3D чашки Петри и внутри чашки. По каплям засейте в посевную камеру 190 микролитров клеточной суспензии, содержащей 40, 500 клеток, и дайте клеткам отстояться в течение 10 минут.

Добавьте два миллилитра среды McCoy's 5A на внешнюю сторону 3D-чашки Петри и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа. Через четыре дня сфероиды становятся достаточно компактными для микроскопии. Добавьте по 200 микролитров лакирующего раствора в каждую лунку 96-луночного U-образного планшета для культуры и инкубируйте в течение одной минуты.

Удалите излишки раствора для покрытия и дайте пластине высохнуть в течение часа. Добавьте 200 микролитров клеточной суспензии, содержащей 500 клеток, в каждую лунку и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа в течение не менее четырех дней.