Качественный и количественный анализ ДНК, извлеченной из образцов мух

Для начала извлеките ДНК из образцов мух с помощью набора для экстракции ДНК. Затем используйте считыватель микропланшетов для определения значений OD260 и OD280 для сравнения чистоты ДНК и концентрации нуклеиновых кислот. Далее готовят стандартные растворы флуориметра, добавляя 190 микролитров рабочего раствора в две центрифужные пробирки по 0,5 миллилитров.

Затем добавьте по 10 микролитров каждого стандартного первого и стандартного второго в рабочие растворы. Держите трубки вдали от света не менее 15 минут. Смешайте два микролитра тестовой ДНК со 198 микролитрами рабочего раствора в центрифужной пробирке объемом 0,5 миллилитра и подержите смесь в темноте не менее 15 минут.

Через 15 минут включите флуориметр и выберите настройку измерения концентрации дцДНК, дальний диапазон. Испытайте первый и второй стандарты, чтобы получить стандартную кривую. Затем поместите образцы для исследования в пробирные лунки.

Отрегулируйте объем спайков ДНК до двух микролитров и выполните измерение. Для визуализации ДНК сначала настроили 20 микролитров ПЦР-амплификации. Поместите пробирки в термоамплификатор и запустите циклы ПЦР.

После ПЦР подвергнуть изделия электрофорезу в 2%-ном агарозном геле. Затем поместите гель на систему визуализации геля для фотоанализа. Оценка чистоты экстрагированной ДНК с помощью считывателя Microplate показала, что все свежие образцы и старый первый образец имели соотношение OD260 к OD280 выше двух.

Напротив, старый второй образец показал более низкое соотношение. Концентрация ДНК, полученная по показаниям OD260, была самой высокой в свежих образцах, за ней следовали старые образцы 1 и самые низкие в старых образцах 2. Электрофоретический анализ выявил полосы в диапазоне от 250 до 400 пар оснований, которые были более выражены в свежих образцах, по сравнению со старыми.