Экстракция ДНК из образцов некрофильных мух

Для начала поместите обрезанные образцы грудной клетки мухи в двухмиллилитровую центрифужную пробирку. Добавьте в пробирку 180 микролитров буфера для лизиса тканей, а затем 20 микролитров протеиназы K.Vortex при 3000 оборотах в минуту в течение 10 секунд и инкубируйте при температуре 56 градусов Цельсия до лизиса тканей. После инкубации снова переведите образцы в вихрь в течение 15 секунд.

Добавьте 200 микролитров буфера для лизиса и тщательно перемешайте вортексом. Затем добавьте 200 микролитров этанола и снова закрутите на 15 секунд. Затем поместите колонку для абсорбции ДНК в двухмиллилитровую пробирку для сбора и пипеткой введите смесь в колонку.

Центрифуга при 6 000 G в течение одной минуты. Сбросить проточный и сборный пробирки. Поместите колонку в новую пробирку и добавьте 500 микролитров буфера для удаления белка.

Центрифугируйте в течение одной минуты и отбросьте поток. Переложите колонку в новую трубку. Добавьте 500 микролитров буфера для опреснения и центрифугируйте при 20 000 г в течение трех минут, чтобы высушить мембрану.

Затем добавьте на мембрану 100 микролитров буфера для элюирования ДНК. Инкубируйте при комнатной температуре в течение одной минуты, а затем центрифугируйте при 6000 G в течение одной минуты для элюирования ДНК. Храните образцы ДНК по мере необходимости.