Перед началом изоляции мышиного эмбриона тщательно очистите область с помощью 70% этанола. Убедитесь, что все инструменты для вскрытия вымыты и стерилизованы. Возьмите пять миллилитров стерильного DMEM, содержащего 10% FBS, и 20 миллилитров DPBS и положите их на лед.
Затем, чтобы провести изоляцию эмбриона, с помощью стереомикроскопа с проходящим световым столиком и камерой, положите правильно усыпленную беременную самку на спину и простерилизуйте область возле входа во влагалище этанолом. С помощью ножниц для рассечения и пинцета приподнимите кожную складку возле входа во влагалище и сделайте небольшой V-образный надрез, медленно обнажая матку беременной матери. Затем рассеките маточный рог плотины, придерживая один его конец пинцетом и разрезав вдоль него.
Обязательно удалите шейку матки. Поместите маточный рог в 10-сантиметровую чашку Петри, содержащую DPBS на льду. С помощью диссекционных ножниц и пинцета удалите мышцу матки вдоль мест имплантации и разрежьте каждое место имплантации или жемчужины, содержащие децидуальные припухлости внутри.
Поместите его в свежий DPBS в шестисантиметровую чашку Петри на льду. Возьмите один участок имплантации. Поместите его в новую шестисантиметровую чашку Петри в верхней части предметного столика стереомикроскопа и добавьте в нее 500 микролитров DPBS.
Отрегулируйте фокусировку микроскопа и источника света. Зажмите место имплантации одним комплектом пинцета в одной руке, а другой рукой медленно введите еще одну пару щипцов в конец места имплантации, срезанный из маточного рога, постепенно обнажая лиственный отек. Чтобы выявить эмбрион, удерживайте противовоспалительный конец изолированной децидуальной припухлости одной парой щипцов, а другой парой медленно сделайте горизонтальный надрез примерно на четверть размера децидуальной припухлости от неправильного конца.
Теперь с помощью обоих щипцов медленно проталкивайтесь от противовоспалительного конца децидуального отека, пока эмбрион не выскочит из только что вырезанного неправильного конца. Как только эмбрион будет раскрыт, приступайте к удалению всех прикрепленных к нему эмбриональных тканей. Если париетальный эндодермальный мешок и эктоплацентарный колбочек спонтанно не отделяются от эмбриона, используйте пару щипцов для их удаления вместе с любой связанной материнской кровью.
Затем, удерживая эмбрион одной парой щипцов, медленно снимите мешок с висцеральным желтком с эмбриона с помощью другой пары щипцов. Найдите теменный эндодермальный мешок и эктоплацентарный конус. С помощью пипетки AP 20 перенесите желточный мешок с не более чем 10 микролитрами DPBS из чашки в восьмиполосковую ПЦР-пробирку на льду.
Сделайте яркие полевые снимки только что выделенных эмбрионов, чтобы убедиться, что стадия однопометников одинакова. С помощью пипетки P200 медленно перенесите эмбрион с 50 микролитрами DMEM, содержащим 10% FBS, в пробирку объемом 1,5 миллилитра, которую держат на льду. Повторите то же самое для всех децидуальных отеков, используя чистые инструменты и новые пластики для каждой изоляции.
