Для начала приготовьте восковые блоки из усыпленных мышей, которым вводили таблетки сяояо. Разрежьте восковые блоки на непрерывные участки толщиной шесть микрометров и выпекайте ломтики при температуре от 70 до 72 градусов Цельсия в течение 30-60 минут. Переложите ломтики в раствор для удаления воска на восемь минут, затем дважды обезвожьте в 75% безводном этаноле в течение пяти минут каждый, прежде чем промыть в PBS в течение пяти минут.
Теперь выполните ремонт под высоким давлением ЭДТА в течение 15 минут. После полоскания PBS добавьте в ткань 3% перекись водорода и выдержите 10 минут. Промойте салфетку три раза PBS по пять минут каждый.
С помощью иммуногистохимического карандаша нарисуйте круг вокруг ткани. После промывки ткани PBS окрасить на ночь в раствор первичного антитела. На следующий день промойте салфетку три раза по пять минут каждый в PBS.
По каплям добавьте вторичное антитело и инкубируйте в течение 60 минут. После промывки PBS инкубируйте ткань в готовом к использованию растворе DAB в течение трех-пяти минут. Теперь окрашиваем ткань в гематоксилин в течение трех минут.
Снова промойте ткань PBS перед тем, как поместить ее в дифференцировочный раствор на 10 секунд. После промывки PBS добавьте обратный раствор на 10 секунд. Наконец, проведите обработку 75% безводным этанолом в течение пяти минут и запечатайте предметное стекло нейтральной смолой.
Окрашивание гематоксилин-эозином показало плотно расположенные трабекулы у фиктивных мышей, в то время как у мышей OVX наблюдались типичные остеопоротические изменения с редкими трабекулами и увеличенными полостями костного мозга. Сравнение микрокомпьютерной томографии показало неполную трабекулярную сеть и истончение костной коры у мышей OVX по сравнению с фиктивными мышами. После медикаментозного вмешательства окрашивание гематоксилин-эозином показало восстановление структуры трабекул и уменьшение полости костного мозга по сравнению с группой OVX.
Индексы визуализации показали меньшее количество переломов трабекул и восстановление сетчатости в группе высоких доз таблеток Xiaoyao по сравнению с группой OVX. Результаты иммуногистохимии показали повышение щелочной фосфатазы и коллагена первого типа и снижение интерлейкина 17, ACT1 и интерлейкина 6 в группе препаратов.
