Выделение первичных эпителиальных клеток поверхности яичников человека для получения органоидов для исследований тканей in vitro

Для начала транспортируйте яичники человека в лабораторию в 0,9% хлориде натрия или аналогичном стерильном физиологическом растворе на льду. Промойте яичники свежим холодным солевым раствором в чашке Петри. Переложите каждый яичник в коническую трубку объемом 50 миллилитров и добавьте два-три миллилитра пищеварительной среды, чтобы покрыть яичник.

Поместите трубку в ванночку с шариками, температурную до 37 градусов Цельсия, на 30 минут. Затем аккуратно переложите завязь в 60-миллиметровую чашку Петри, содержащую 10 миллилитров собирательной среды. С помощью скребка для клеток аккуратно потрите поверхность яичника, содержащую эпителиальные клетки поверхности яичников человека.

Промойте скребок в среде перед тем, как соскоблить еще не менее двух раз. Перенесите эпителиальные клетки поверхности яичников человека в среду для сбора в 15-миллилитровую пробирку. Вращайте ячейки при температуре 240G в течение пяти минут.

Если гранула имеет красный цвет, указывающий на загрязнение эритроцитами, ресуспендируйте гранулу в одном миллилитре буфера для лизиса эритроцитов. Затем добавьте четыре миллилитра PBS с кальцием и магнием и центрифугируйте при 240G в течение пяти минут. Криоконсервация гранул эпителиальных клеток поверхности яичников человека для будущего использования в культуре.