Покрытие фибронектином и посев клеток A431 для электропорации на основе пористого субстрата

Чтобы начать покрытие фибронектином, выберите 12 вкладышей и 2 24-луночных планшета. Поместите вкладыши в одну луночную пластину, создав два ряда по шесть. Приготовьте один микрограмм на миллилитр раствора фибронектина, смешав 52 микролитра стокового раствора фибронектина и 1,2 миллилитра PBS в 1,5-миллилитровой пробирке.

Распределите по 100 микролитров раствора фибронектина в каждую вставку. Инкубируйте вставки в лунке при температуре 37 градусов Цельсия в течение трех часов. После инкубации удалите излишки раствора фибронектина из каждой вставки.

Промойте вкладыши дважды, добавив в каждую вставку по 100 микролитров стерильной дистиллированной воды. Удаляйте воду в том же порядке, в котором она была добавлена, чтобы обеспечить равномерное время промывки между вставками. Теперь промойте вкладыши 100 микролитрами среды для клеточных культур, а затем удалите среду из вкладышей.

Далее засейте во вкладыши 200 микролитров клеточной суспензии А431. Для отрицательного контроля пипеткой введите 200 микролитров среды для клеточных культур во вкладыши. С помощью перманентного маркера проведите линию, разделяющую пластину второго луночного колодца на два столбца шириной в три лунки.

Разделите каждый столбец на строки. Обозначьте каждый регион в сетке соответствующими параметрами. Добавьте по одному миллилитру среды для клеточных культур в каждую лунку.

Перенесите вкладыши из подготовительной пластины в соответствующее место в маркированной экспериментальной пластине и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия в течение 12 часов.