Для начала прикрепите большой наконечник для пипетки P200 к шприцу объемом 10 миллилитров и наполните его PBS. С помощью щипцов введите кончик шприца в отверстие кишечного сегмента, выделенного от усыпленной мыши. Держите кишечный сегмент на шприце с помощью щипцов и осторожно промойте со скоростью примерно 50 микролитров в секунду, чтобы удалить содержимое.
Соберите содержимое кишечника в пустую лодку для взвешивания. Затем разложите влажный кишечный сегмент по прямой линии на полоске сухой маркированной целлюлозной фильтровальной бумаги. С помощью ножниц для вскрытия разрежьте кишку в продольном направлении по брыжеечной линии, примерно по пять миллиметров за один раз.
Используйте нижний край ножниц или пару щипцов, чтобы положить разрезанную ткань на фильтровальную бумагу. Теперь положите еще один лист фильтровальной бумаги поверх кишечного сегмента, чтобы он не скручивался или не терял свою форму во время фиксации. Чтобы закрепить салфетку на месте, скрепите края фильтровальной бумаги, избегая сшивания ткани.
Погрузите ткани в 10% нормальный буферный формалин. Аккуратно снимите верхний кусок фильтровальной бумаги, касающийся просветной стороны кишечника. С помощью щипцов осторожно очистите кишечник от нижнего куска фильтровальной бумаги, прежде чем выбросить его.
Затем трижды промойте салфетку в PBS, чтобы удалить формалин из ткани. С помощью щипцов обратного действия возьмите кусочек кишечника по короткому краю просветной стороной вверх и поверните щипцы, чтобы свернуть ткань. Поместите салфетку в лодку для сухого взвешивания.
Удерживайте ткань на месте щипцами в одной руке. Осторожно раскройте щипцы обратного действия и освободите ткань, используя другие щипцы для вытеснения ткани из щипцов обратного действия. Вставьте в ткань рассекающий штифт размера 00.
С помощью кусачек удалите острый кончик булавки. После того, как все образцы будут свернуты, поместите все четыре рулона салфеток в одну кассету и вставьте кассету в процессор для салфеток. На станции заделки поместите небольшое количество парафина в форму.
Извлеките четыре рулета из кассеты и поместите их в индивидуальную форму, уложив как можно ровнее. Добавьте еще парафина, чтобы заполнить форму. Переместите форму на холодную плиту и убедитесь, что все швейцарские рулеты ровно лежат на дне формы.
Поместите на форму крышку маленькой кассеты с маркировкой. Как только воск застынет, извлеките блок из формы.
