Извлечение и хранение летучих половых феромонов самок C. elegans и C. remanei

Для начала разделите стадию 200 L4, fog-2 Caenorhabditis elegans у девственных самок за день до экстракции феромонов. Распределите самок на три отдельные шестисантиметровые пластины OP50 NGM. В день экстракции пересадите 100 девственных однодневных самок fog-2 в микроцентрифужную пробирку, содержащую один миллилитр буфера M9.

После последней промывки инкубируйте самок в 100 микролитрах буфера M9 в течение шести часов при температуре 20 градусов Цельсия, чтобы обеспечить выработку феромонов. Аналогичным образом, изолируйте от 15 до 20 самок Caenorhabditis remanei стадии L4 на трех планшетах OP50 NGM. После мытья инкубируйте пять девственных самок в 100 микролитрах буфера M9 в течение шести часов при температуре 25 градусов Цельсия.

Центрифугируйте червей при 15 000 G в течение 30–60 секунд. Осторожно переложите надосадочную жидкость, содержащую феромоны, в чистую пробирку. Выбросьте трубку с гранулой червя.

Храните собранный экстракт летучих половых феромонов при температуре минус 80 градусов Цельсия.