Анализ SPR для определения аффинности связывания мембранных рецепторов витамина А с их физиологическим лигандом RBP4

Начните с иммобилизации очищенного белка msRBP4 на сенсорном чипе. Для этого перейдите в меню «Выполнить», выберите мастер и перейдите к опции обездвиживания. Далее разведите лиганд в иммобилизационном буфере до концентрации 10 микрограмм на миллилитр, и распределите реагенты для связывания по флаконам.

Теперь откройте окно мастера настройки иммобилизации. Выберите чип CM5 и иммобилизуйте проточную ячейку 2 варианта. Затем установите целевой уровень на 1200 единиц отклика для R максимум 30 единиц отклика в кинетическом исследовании.

Выберите этаноламин в качестве раствора для стирки. Введите имя RBP4 и нажмите кнопку Далее. В диалоговом окне Положение стойки нажмите кнопку Извлечь стойку.

Снимите стойку. Поместите флаконы, содержащие указанные объемы каждого реагента. А затем вставляем в штатив с образцом флаконы.

После этого нажмите OK и Next. Наконец, в диалоговом окне «Подготовка протокола выполнения» нажмите «Пуск», а затем «Сохранить».