Для начала подтвердите обезболивание мыши, оценив отсутствие реакции на пощипывание пальца ноги. Закрепите мышь во внутреннем держателе животного так, чтобы ее голова и верхняя часть задних плеч были открыты через прямоугольное отверстие, в то время как спинные и нижние задние конечности оставались защищенными. Наложите хирургическую ленту на верхнюю часть задних плеч, чтобы зафиксировать мышь.
Вставьте внутренний держатель животного во внешний держатель. После открытия вторичной анестезиологической линии внутри держателя для животного закройте конец держателя, чтобы предотвратить вытекание анестетика из трубки и перемещение мыши во время эксперимента. Выровняйте четырехмиллиметровое круглое отверстие внешнего держателя животного непосредственно над левым глазом мыши.
Расположите держатель для животных на XY-столе с помощью ручек управления так, чтобы его отверстие совпадало со стволом пейнтбольного ружья, а внешняя поверхность находилась на расстоянии пяти миллиметров от конца ствола. После калибровки запустите последовательность сброса воздуха под избыточным давлением, чтобы подать две серии по 15 фунтов на квадратный дюйм с интервалом 0,5 секунды. Для мыши-фиктивной группы поверните держатель животного в сторону от бочки, заблокируйте воздух картонным щитком и подставьте его под шум воздуха под избыточным давлением.
Здоровые плотно упакованные аксоны наблюдались в фиктивной группе. Напротив, в группе ITON наблюдались признаки дегенерации аксонов, включая нарушения формы аксонов и разрушение миелиновой оболочки. Общее количество аксонов значительно уменьшилось в группе ITON по сравнению с фиктивной группой.
Достоверное увеличение дегенеративных профилей выявлено в группе ITON по сравнению с фиктивной группой. Повышенная пролиферация микроглии наблюдалась в сетчатке мышей ITON, при этом микроглия распространялась на внешний ядерный слой. По сравнению с фиктивной группой, где микроглия осталась в их типичных слоях сетчатки.
Интактные синаптические связи между палочковидно-биполярными клетками и фоторецепторами были отмечены как у ITON, так и у фиктивных мышей, синаптопатия не была обнаружена.
