Получение наночастиц хитозана/дцРНК для интерференции РНК на основе кормления у шелкопрядов

Для начала смешайте 0,1 моляра ацетата натрия и 0,1 моляра уксусной кислоты в деионизированной воде при pH 4,5. Затем приготовьте 100 миллимолярный буфер из сульфата натрия в деионизированной воде комнатной температуры. Взвесьте коммерческий хитозан для приготовления 0,02% по объему и растворите его в приготовленном 100 миллимолярном буфере из ацетата натрия.

Затем растворите 20 микрограммов двухцепочечной РНК или дцРНК в 50 микролитрах воды, свободной от нуклеаз. Добавьте этот раствор к 50 микролитрам буфера сульфата натрия, чтобы получить 100 микролитров раствора дцРНК. Далее добавьте по 100 микролитров приготовленного раствора хитозана к 100 микролитрам раствора дцРНК и 50 миллимолярного сульфата натрия.

После смешивания нагрейте растворы до 55 градусов Цельсия в течение одной минуты. Немедленно переведите смесь на высокой скорости в течение 30 секунд, чтобы облегчить образование наночастиц. Центрифугируйте смесь при 13 000 г при комнатной температуре в течение 10 минут до получения белой гранулы.

Переложите надосадочную жидкость в свежую пробирку объемом 1,5 миллилитра и дайте грануле высохнуть на воздухе при комнатной температуре в течение 10 минут. С помощью микрообъемного спектрофотометра определить концентрацию дцРНК в надосадочной жидкости. Чтобы рассчитать процентное содержание инкапсулированной дцРНК, разделите оставшееся в надосадочной жидкости количество на исходное количество дцРНК.