Для начала загрузите импульсные программы ЯМР в каталог на компьютере, на котором работает ЯМР-спектрометр, и настройте версию TopSpin. Загрузите импульсы в форме ЯМР в каталог и убедитесь, что версия TopSpin обновлена соответствующим образом. После определения спектральной ширины и соответствующего времени сбора данных введите edc в программном обеспечении TopSpin в новый каталог, чтобы скопировать эксперимент HSQC.
Чтобы открыть тип параметров последовательности импульсов, нажмите на три точки рядом с параметром PULPROG, чтобы изменить программу импульсов на эксперимент с азотом-15 R1 rho. Дважды щелкните по программе пульса, нажмите «Установить PULPROG на набор данных» и подтвердите нажатием OK. Введите ased, чтобы открыть параметры последовательности импульсов. Введите все недостающие силы градиента и длины градиента, как указано в последовательности импульсов.
Затем введите для счетчика контура L3 половину записи nitrogen-15 TD в окне параметра регистрации. Введите для счетчика петли L6 количество записанных точек данных релаксации для аппроксимации кривой релаксации. Установите адиабатический TanhTan_half.
nl как форма импульса азота-15 SP8. Затем установите адиабатический TanhTan_half2nd. nl как форма импульса азота-15 SP9.
Убедитесь, что длительность импульсов достаточна для адиабатичности с P8, установленным на 3 000 микросекунд. Затем установите задержку восстановления между сканированиями, D1, не менее двух секунд или больше. Установите для сканирования макета значение не менее 64.
В качестве отправной точки установите количество сканирований равным четырем и используйте кратное четырем, если отношение сигнал/шум слишком низкое. Установите O1 на откалиброванную несущую частоту, O2P на 176 частей на миллион и скопируйте O3P из эксперимента с протонным азотом-15 HSQC. Теперь установите длину импульса P7 на калиброванную ранее длину импульса 90 градусов.
Затем скопируйте уровень импульсной мощности 90-градусного импульса на PLW3 и PLW7. После этого установите длину импульса P1 и P19 равной длине протонного импульса 90 градусов. Задайте количество приращений в косвенном размере, TD равно L3 на два на L6. Затем установите формованный импульс SP5 в форму I-BURP2 и длительность импульса P15 равной 2 000 микросекунд.
Затем откройте окно Shape Tool, нажав на букву E рядом с импульсом в форме I-BURP2 в окне параметров последовательности импульсов TopSpin. Чтобы смоделировать сформированный импульс, нажмите кнопку «Начать моделирование ЯМР». Проверьте длину импульса и угол поворота в окне моделирования и нажмите Start NMR SIM, чтобы продолжить.
Проверьте диапазон возбуждения в моделировании и выберите подходящую длину импульса I-BURP2, чтобы покрыть спектральную дисперсию протонов и избежать возбуждения воды. Установите P15 на сформированную длину импульса из окна моделирования с лучшим импульсом I-BURP2. Теперь установите SPOFFS5 для регулировки несущей частоты импульса I-BURP2, смещая диапазон возбуждения влево или вправо, чтобы избежать возмущения намагниченности воды.
Затем откройте инструмент Bruker Shape Tool и нажмите кнопку «Начать моделирование ЯМР», чтобы определить подходящий уровень мощности сформированного импульса. Установите длину импульса I-BURP2 равной длине импульса по форме и обратите внимание на мягкую прямоугольную длину протонного импульса 90 градусов, показанную в окне моделирования. Введите calcpowlev для вычисления разницы уровней мощности в децибелах между жестким 90-градусным протонным импульсом и мягким прямоугольным 90-градусным протонным импульсом.
Скопируйте уровень мощности жесткого 90-градусного протонного импульса в SPW5 и отрегулируйте, добавив заученную разницу в децибелах. Чтобы определить уровень мощности спин-замка, рассчитайте соответствующую длину импульса азота-15 при 90-градусном давлении. Используйте calcpowlev для вычисления разницы мощности в децибелах между мощностью спин-фиксации и жестким импульсом азота-15 при температуре 90 градусов.
Скопируйте уровень мощности жесткого 90-градусного импульса азота-15 на PLW7 и отрегулируйте уровень мощности PLW8 с блокировкой вращения, сложив рассчитанную разницу мощности. Скопируйте уровень мощности спин-локатора PLW8 на уровни мощности SPW8 и SPW9. Чтобы определить уровень мощности развязки азота-15, используйте calcpowlev для вычисления разницы мощностей между мощностью 90-градусного импульса развязки азота-15 и 90-градусного жесткого импульса азота-15.
Скопируйте уровень мощности 90-градусного жесткого импульса с азотом-15 PLW7 на уровень развязывающей мощности PLW31 и отрегулируйте, добавив рассчитанную разницу мощности в децибелах. Для температурной компенсации включите определение линии TEMP_ в импульсной программе. Установите P18 на максимальную продолжительность спин-блокировки, используемой в эксперименте с азотом-15 R1 rho.
В случае азота-15 образцы, меченные углеродом-13, включают в себя линию, определяющую LABEL_CN в программе импульсов. Установите P4 на рассчитанную длину импульса. Используйте calcpowlev для вычисления разницы мощности в децибелах между P4 и жестким импульсом углерода-13.
Скопируйте уровень мощности жесткого импульса углерода-13 в PLW4 и добавьте рассчитанную разницу мощности в децибелах. Скопируйте PLW4 в PLW2. Чтобы определить подходящие задержки релаксации для отбора проб, запустите первые восемь свободных индукционных затуханий, или FID, и обработайте их.
Выбирайте записи vplist, в которых пиковая интенсивность эксперимента с самой длинной задержкой уменьшается по крайней мере до единицы над e, но не ниже 25% по сравнению с экспериментом с самой короткой задержкой. Введите rga в командной строке, чтобы определить коэффициент усиления ресивера. Запустите тестовый прогон эксперимента с nitrogen-15 R1 rho, введя zg в командной строке.
Убедитесь, что сигнал воды подавлен при всех задержках. Кроме того, проверьте приращение девять, второе приращение квадратурной схемы детектирования.
