Гибридизация бактериальных клеток с помощью олигонуклеотидного зонда, меченного флуорофором, с использованием флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)

Для начала возьмем бактериальные клетки, зафиксированные в параформальдегиде. Центрифугируйте клетки при 14 000 x g в течение 10 минут. Затем удалите надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте гранулу в 100 микролитрах 96% этанола аналитического качества и инкубируйте в течение одной минуты при комнатной температуре. Повторите центрифугирование в течение пяти минут, затем удалите этанол и высушите гранулу ячейки на воздухе. Теперь гибридизируйте клетки в растворе, содержащем флуоресцентно меченный олигонуклеотид, в течение трех часов при температуре от 46 до 46 градусов Цельсия.

Сразу после гибридизации образцы центрифугируют в роторе, предварительно нагретом до 46 градусов Цельсия, в течение 15 минут при максимально допустимой температуре. Затем промойте образцы в буфере с подходящей жесткостью в течение 15 минут при температуре 48 градусов Цельсия. После центрифугирования образца еще раз промойте клетки 500 микролитрами ледяного PBS.

Восстановите их в 20 микролитрах PBS и храните при температуре четыре градуса Цельсия до дальнейшего использования.