Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы эволюционной биологии, такие как эволюция социальной коммуникации. Основными преимуществами этой техники являются то, что она дает прямые доказательства формы и наличия миметического мускулатуры. Он устраняет догадки в процессе вскрытия, и он сохраняет мышечные слои.
В сочетании с DiceCT, обратное вскрытие является новым золотым стандартом для исследования миметических мышц. Для начала следуйте сопроводительной текстовой протоколу фиксации и подготовки образцов. Затем перенесите образец в дымовой капот.
Затем промыть образец в течение нескольких часов в проточной воде. После того, как образец был промыт, погладить его сухим бумажными полотенцами, и передать его на рабочую станцию. С мозгом и чрезмерной кальварии удалены, сделать один разрез вблизи области глабеллы черепа, а другой вдоль хвостового аспекта черепа, где черепная кость не повреждена.
Пальпировать для внешнего затылочной выступ на хвостовой кромке черепа. Это знаменует собой область, где череп встречается позвоночника. Затем используйте скальпель и сделать разрез средней линии, начиная с внешнего затылочной выступ.
Вырезать образец rostrally над теменной и лобной области черепа. Продолжить и пройти над орбитальной области между глазами, вниз носовой области, вплоть до внешней носовой области между nares. Затем сделайте разрез на нижней и центральной резцах и переместите скальпель в сторону ключицы.
В этот момент выберите одну сторону маски для лица и отпустите ее из черепа, оставив другую сторону на месте. Начиная с затылочной области, используйте скальпель, чтобы вырезать маску для лица, в том числе миметическую мускулатуру, от затылочной кости черепа, потянув маску рострально и боково. Отрежьте мышцу occipitalis далеко от черепа, оставляя небольшое количество мышц позади на черепе, ТАК ЧТО его вложение все еще может быть визуализировано, как только маска для лица была удалена.
Оставив часть мышцы позади на костлявом и плотоядном черепе, вложения могут быть сохранены и записаны на более позднее время. После того, как внешнее ухо хит, найти ушные мышцы. Прорезать эти мышцы, так что небольшая часть каждой мышцы остается с черепом.
Затем прорежьте эластичный хрящ, прикрепив внешнее ухо к черепу. Продолжайте тянуть маску rostrally, и освободить каждую миметическую мышцу от черепа, оставляя небольшую часть каждой мышцы позади на черепе. После того, как есть нетронутыми маски для лица с одной стороны черепа, дайте ему сидеть с мускулатурой подвергается воздействию воздуха, в течение одного-трех часов, в зависимости от размера образца.
Это позволит высасыть соединительной ткани на маске лица, и увеличить цветовой контраст между мышцами и соединительной ткани. С контрастом между мышцами и соединительной ткани в настоящее время усиливается, использовать номер три скальпеля, миппы и микро ножницы, чтобы удалить достаточно соединительной ткани, для того, чтобы визуализировать мускулатуру. Поверхностный слой миметического мускулатуры в этом обратном вскрытии, аккуратно поднимите и отделите глубокий слой мускулатуры от поверхностного слоя, а также удалите соединительные ткани, окружающие поверхностную мускулатуру.
После завершения, вернуть в результате маски для лица обратно в формалин. Процедура может быть приостановлена здесь, прежде чем перейти к дальнейшему вскрытию, или до продолжения окрашивания. На каждом промежуточном шаге, позволяют достаточное время сушки маски для лица, так что соединительная ткань может быть легко различимы из мышечной ткани.
Для того, чтобы миметическая мускулатура визуализировалась с помощью КТ-сканирования, окрашивайте маски с помощью раствора йода, помещая маску в окрашивающий раствор Лугола, как описано в сопроводительном текстовом протоколе. Процесс окрашивания обычно занимает около двух недель, в 1,75%Lugol решение. Тем не менее, это время варьируется, в зависимости от нескольких факторов.
Рекомендуется периодическое сканирование с сопровождающейся регулировкой окрашивания. Для КТ-сканирования сначала подготовьте маску для лица, используя деревянные зубочистки для установки маски для лица на материал низкой плотности, такой как цветочная пена. Это позволит устранить любые морщины в маске, и ограничить его движение, как он немного высыхает во время сканирования.
Затем поместите образец в контейнер низкой плотности и закретув его на место. После того, как безопасный, поместите образец в сканер, закройте дверь, и включите рентгеновские лучи. Затем найте параметры КТ для рентгенографии с высоким разрешением.
Использование межслойного интервала и межки пиксельного расстояния около 0,05 миллиметра для этих сканирований, так как мелкие фасциклы будут скрыты при более низком разрешении. Если фасцикллы не могут быть полностью визуализированы, из-за перенамывания, поместите маску для лица в раствор де-пятна, такие как 10%формалин, или 5%тиосульфат натрия, чтобы удалить некоторые пятна. После регулировки окрашивания, сканировать маску лица снова, и продолжать вносить необходимые коррективы, пока все фасциклы не смогут быть полностью визуализированы.
С помощью обратного вскрытия для создания маски для лица иногда можно увидеть более полное представление о миметических мышцах, чем в традиционной методологии вскрытия. Этот метод работает на различных размеров тела, от крошечных, небольшое тело Marmoset, для крупных телесных приматов, таких как шимпанзе. У малотелых приматов, которые имеют gracil лицевых мышц, некоторые из лицевой мускулатуры могут быть неотличимы от окружающих соединительной ткани, и могут быть потеряны во время вскрытия.
Пятно йода, такие как Lugol's, может улучшить контраст и помочь решить как отдельные миметические мышцы, а также отдельные мышцы fascicles, и в первый раз, получить целые объемы мышц этих мышц грациля. Как показано здесь, некоторые из очень маленьких мышц, связанных с внешним ухом, хорошо видны в diceCT сканирования. Это не редкость для этих мышц, которые будут пропущены в некоторых обратных процедур вскрытия, возможно, из-за их небольшого размера.
Эта трехмерная визуализация громкости позволяет для базового порога громкости и цветного отображения, визуализировать мускулатуру легче, чем с перекрестным допросом в одиночку. Здесь вы можете видеть, что отдельные мышечные фасциклы хорошо видны в поперечном сечении, что делает цифровое вскрытие возможным. При попытке этой процедуры, важно иметь в виду, что вы должны двигаться медленно, осторожно и с обсуждением, так как этот метод является разрушительным по своему характеру.
После этой процедуры, другие методы, такие как гистологическая обработка, могут быть использованы для ответа на дополнительные вопросы, такие как диаметр волокна, или миозин волокна ввода. После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в области эволюционной биологии, чтобы исследовать эволюцию выражения лица и визуальной коммуникации у не-человеческих млекопитающих, и у людей. Не забывайте, что работа с формалином и заряженным скальпелем может быть крайне опасной.
Меры предосторожности, такие как полоскания вашего образца, и зная, где ваш скальпель во все времена, должны быть приняты при выполнении этой процедуры.
