Наша уникальная система доставки лекарств, которая использует 20 нанометровых частиц золота в двух конкретных коротких пептидах, может стабилизировать частицы золота в физиологическом растворе и повысить его клеточное поглощение, и, таким образом, эффективно доставить пептидные или другие препараты в клетки. Наш пептидный гибрид ВНП легко синтезируется и стабилен. Используя гибрид пептида наночастиц золота в качестве носителей наркотиков, мы можем передавать пептидные препараты в клетки эффективно и в изобилии.
Мы лечили ишемию-реперфузии травмы в легких с нашей GNP / PKCi гибрид. ВНП приносит пептиды ингибитора PKC в цитоплазму. Этот метод доставки был в состоянии уменьшить более тяжелые травмы легких, используя более низкую дозировку PKCi, чем другие методы доставки.
Чтобы начать эту процедуру, получить пептиды из морозильной камеры при температуре минус 20 градусов по Цельсию, и разморозить их при комнатной температуре. Используйте микро-шкалу, чтобы весить 0,01 грамма каждого оттаявого пептида, и передать каждый пептид в отдельную 50 миллилитровую коническую трубку. Добавьте 18,74 миллилитров деионизированной воды в трубку P2 и 16,93 миллилитров деионизированной воды в трубку P4.
Добавьте 8,21 миллилитров 50%ацетонитрила, разбавленного деионизированной водой, в трубку ингибитора дельты PKC. Вихрь пептидных растворов кратко. Затем поместите трубки в звуковой на 40 мегагерц в течение пяти минут.
После этого перенесите растворы в кабинет биобезопасности. Очень важно поместить коническую трубку 50 мл в звуковой в течение пяти минут. Если этот шаг будет пропущен, GNP/PKCi сформирует агрегации.
Перенесите один миллилитр каждого пептидного раствора в свою новую 50-миллилитровую коническую трубку. Добавьте 19 миллилитров деионизированной воды в трубки, содержащие P2 и P4. И добавьте 19 миллилитров 50%ацетонитрила в трубку, содержащую ингибитор дельты PKC. Добавьте 475 миллилитров раствора P2, 25 микролитров раствора P4, 500 микролитров раствора ингибитора дельты PKC в 15 миллилитровую трубку.
Затем добавьте девять миллилитров 20 нанометрового раствора ВНП в ту же трубку. Удалите комбинированный раствор из шкафа биобезопасности и заверните трубку в алюминиевую фольгу. Поместите трубку на шейкер на ночь.
На следующий день верните образцы в кабинет биобезопасности. Перенесите одну миллилитровую алицита раствора GNP/PKCi в микротрубки диаметром 1,5 миллилитра. Центрифуга микротрубок в микро центрифуге в 15294 раза г и при четырех градусах Цельсия в течение 30 минут.
Перенесите микротрубки обратно в шкаф биобезопасности и удалите супернатант из каждой трубки, гарантируя при этом, что гранулы ВНП не нарушаются. Переусейте каждую гранулу в нужном растворители в соответствии с требуемой концентрацией. Для оценки гибридной растворимости GNP/PKCi, залить 0,5 миллилитров решения GNP/PKCi в накопительный кювет.
Поместите кювет на спектрофотометр UV-Vis и проверьте пик поглощения. В этом исследовании ингибитор протеиновой киназы C-дельта спрягается с золотыми наночастицами для формирования гибрида GNP/PKCi. Необходимо позаботиться об оценке биофизических свойств гибрида, так как золотые наночастицы, как правило, агрегируются в растворителя.
Когда наночастицы агрегируются, цвет раствора изменится с розового на фиолетовый. Образцы анализируются с помощью спектрофотометра UV-Vis, который способен обнаруживать с высокой степенью чувствительности. Если гибрид не агрегируется, пик поглощения должен быть на уровне 525 нанометров.
Если ВНП будет агрегирован, пик поглощения будет перенесен вправо. Как видно, когда образуются агрегаты, плотность дельты оптической уменьшается. При разработке гибридов пептидов ВНП важно помнить, что соотношение пептидов и раствора ВНП должно быть от одного до девяти.
Эта формула GNP/PKCi может быть использована для травмы ишемии-реперфузии в системах органов, кроме легких. Любые пептиды могут прикрепляться к ВНП, если эти пептиды имеют остатки цистеина в N-термине. Это означает, что пептидный гибрид ВНП может быть использован для транспортировки других пептидных препаратов в клетку.
Рационально разработанные пептиды являются новой технологией, которая может привнося в эти клетки специфическое белково-белковое взаимодействие. Этот метод, разработанный здесь, может быть использован для доставки новых пептидных препаратов или для модифицированных версий существующих препаратов.
