Понимание биологического состава экологических твердых частиц имеет важное значение для изучения его значительного воздействия на здоровье человека и распространение болезней. В этом методе отбора проб биоаэрозоля и анализа, может иметь широкое применение во многих областях исследования, таких как экологический мониторинг и обнаружение патогенов в воздухе. Чтобы определить общее количество твердых частиц, сначала оснастить бортовой счетчик лазерных частиц датчиком для мониторинга температуры и относительной влажности.
Затем соберите вещество частицы через порт отбора проб воздуха в верхней части бортового лазерного счетчика частиц и используйте тестовые модули внутри сэмплер для измерения размера каждого класса частиц одновременно каждые пять минут. Для сбора образцов твердых частиц с помощью циклонических аэрозольных пробоя установите циклонический аэрозольный сэмплер для сбора проб в 323 литра в минуту в течение шести часов сбора и используйте функцию автоматической очистки для мытья внутренней части пробоя три раза стерильной водой. Затем поместите сэмплер в одиночку на полку или пол и начать сбор.
В конце периода сбора храните все образцы при 20 градусах Цельсия, защищенные от света, до их анализа. Для сбора твердых частиц с помощью фильтров оснастите высокой объемной пробоотборитель воздуха фильтрами объемом 20,32 х 25,4 квадратных сантиметра и установите скорость потока 1000 литров в минуту в течение соответствующего периода сбора. В конце периода сбора храните все образцы при 20 градусах Цельсия, защищенные от света, до их анализа.
Для биологического анализа состава собранных образцов фильтра поместите каждый фильтр в 50-миллилитровую коническую трубку с образцом, обращенным внутрь, и задней частью фильтра, обращенного к стенке трубки. Добавьте 10 бусин в центральную область каждой трубки в сторону фильтра, содержащего образец, и вихрь трубки в течение 15 минут при комнатной температуре. Передача жидкости из каждой трубки в новые 50 миллилитровых трубок и усилить V1 в V3 области бактериальной 16S рекомбинантной ДНК и ITS области грибковых рекомбинантных РНК оперон полимеразы цепной реакции в соответствии со стандартными протоколами.
Для отбора проб и выращивания культовой воздушно-капельным путем бактерий и грибков, установить международный стандарт Андерсен шестиступенчатый пробоотборитель на скорость потока 28,3 литров в минуту в течение 35 минут сбора период и место соевый кейсин дайджест агар культуры пластины в каждой стадии пробоотбора. Попробуй шесть этапов с Андерсеном шестисюпенчатый сэмплер, как это определено аэродинамических диаметров частиц в воздухе, хранение бактериальных частиц на пластины культуры, как они собираются. Культура воздушно-капельным путем бактерий сбора пластин при 37 градусов по Цельсию в течение 24 до 48 часов, прежде чем считать колонии формирования единиц бактерий на каждой пластине образца для каждого этапа.
После 48 до 72 часов культуры, собирать бактерии из каждой пластины в две миллилитровые центрифуги труб и извлечь ДНК с помощью нескольких источников ДНК извлечения комплект в соответствии со стандартными протоколами. В этой репрезентативной выборке с молочной фермы концентрация аэрозольных частиц была самой высокой в декабре и самой низкой в октябре, возможно, из-за изменения температуры и влажности. Концентрация вдыхаемых аэрозольных частиц, способных достигать глубоких дыхательных путей, составила более 99% от общей концентрации частиц, что создает серьезную потенциальную опасность для человека и животных.
Здесь анализ образцов биоаэрозоля, собранных в туманные дни в кампусе Пекинского технологического института 20 декабря 2016 года, показывает, что циклонический аэрозольный сэмплер собрал гораздо больше родов бактерий, чем большой объем пробоя воздуха с фильтрами. Оба сэмпайсера продемонстрировали равную эффективность сбора и почти одинаковое количество изобилия рода для сбора грибов однако. Как показано на этой цифре, Андерсен шестисюпенчатый сэмплер может быть использован для сбора различных типов воздушно-капельным путем культивирования бактерий, присутствующих в различных средах, например, в четырех различных типов свиней оценивается в этом исследовании.
Последующая культура бортовых образцов показала, что содержание различных преобладающихся бактерий родов варьировалось между различными объектами. Существует множество факторов, таких, как температура, влажность, концентрация биоаэрозоля и условия окружающей среды, которые следует учитывать при определения типа метода отбора проб аэрозолей. Метагеномика также может быть использована для получения генетической информации в целом без необходимости отделять отдельные организмы.
Наши протоколы и наши результаты могут помочь другим исследователям во всем мире в дальнейшем изучить воздействие грибковых и бактериальных биоаэрозолей на здоровье в различных условиях окружающей среды.
