Острая печеночная недостаточность или ALF, как правило, определяется как быстрое развитие травмы печени в здоровой печени и сопровождается серьезным нарушением его основных функций. Ортотопическая пересадка печени является единственным доступным лекарством в большинстве случаев. Но из-за нехватки доноров печени, уровень смертности у пациентов ALF очень высок.
Для изучения потенциала альтернативных терапевтических подходов и лучшего понимания патофизиологии АЛФ используются животные модели заболевания. Многие модели ALF основаны на гепатотоксических эффектах ацетаминофена, тетрахлорида углерода, конканавалина А, липополисахарида, D-галактосамина и тиоацетамида. Однако они имеют ряд недостатков, таких, как низкая воспроизводимость и обратимость, токсичность для других жизненно важных органов, плохое отражение патологии заболеваний человека и вариации видов.
Таким образом, существует необходимость в более лучшей модели системы, которая воспроизводится и позволяет достаточный промежуток времени для изучения последствий терапевтического вмешательства. В текущем исследовании, модель ALF у крыс была создана путем объединения эффектов частичной гепатэктомии и ацетаминофен гепатотоксичности. Медианная и левая лобная доля печени удаляются до акцизной массы 70%печени, а далее, ацетаминофен дается вызвать ALF.
Развитие ALF в модели характеризуется биохимическим и гистологическим анализом, а обратимость повреждения печени подтверждена трансплантацией сингенеических здоровых гепатоцитов крыс. Wistar Крысы, имеющие вес тела в пределах от 180 до 250 граммов были использованы в текущем исследовании. Следующие шаги описывают хирургическую процедуру индукции ALF у крысы.
Это животное анестезируется путем инъекций кетамин-ксилазин смеси интраперитонально. Полная анестезия подтверждается щипать ноги животного, и дальнейшие процедуры проводятся только тогда, когда нет педали рефлекс. Для предотвращения высыхания роговицы, карбокси метил-целлюлозы на основе глазной капли применяется к обоим глазам.
С помощью белой ленты животное прижаваться к хирургической доске. Волосы удаляются из верхней правой брюшной хирургической области с помощью электрического клипера. Дезинфицировать хирургическое место тремя чередующимися скрабами 70% этанола и йода повидоне с помощью стерилизованных ватных подушечек круговыми движениями.
Кожа, которая будет сокращена отмечена чуть ниже грудины перпендикулярно xiphoid и параллельно грудной клетки. Стерильный лист драпировки с отверстием около трех сантиметров на один сантиметр помещается над отмеченной кожей. Поперечный разрез около двух-трех сантиметров делается вдоль отмеченной линии с помощью скальпеля.
Крепление кожи с основным мышечным слоем в непосредственной близости от наклонной области аккуратно удаляется стерильными увлажненными кончиками хлопка. Далее поперечный разрез делается через брюшной слой прямо под процессом xiphoid. Левая доля печени подвергается, давая нежное давление на грудную клетку с помощью двух соленых увлажненной хлопчатобумажные кончики.
Стерильная петля нейлоновой нити поскользнулся вокруг открытой доли печени. Петля тщательно доставлена к основанию доли с помощью микро рассечения миппов или ватных тампонов. С помощью микрохирургии держателя иглы и микро типсов, два конца петли связаны, размещение узел как можно ближе к основанию доли, как это возможно.
Это для сужения кровеносных сосудов и уменьшить кровотечение после удаления доли печени. Два дополнительных узла связаны с другой стороны. Связанная доля разрезается чуть выше узла с помощью ножниц микрохирургии, которая оставляет ишемический пень.
Аналогичным образом, средняя доля печени поднимается с помощью хлопка советы. Признать уникальную форму средней доли печени. Поместите петлю нейлоновой нити над долей, прочно свяжите ее концы.
Два дополнительных узла связаны с другой стороны и переразделяют долей. После удаления долей, брюшной полыш зашивается с помощью абсорбируемого кошачьего хрома 4/0 абсорбируемого шва с непрерывными стежками с последующим швом кожи с простым прерванным швом. После закрытия кожи раствор йода повидоне наносится по всему хирургическому участку.
Лист драпировки удаляется, и животное снимается с хирургического совета. Доза антибиотика 12 миллиграмм цефотаксим в одном мл 5%глюкозного раствора дается intraperitoneally животному, чтобы защитить его от риска послеоперационной инфекции. Для облегчения боли после операции, обезболивающий мелоксикам, как правило, 1 мг на кг массы тела дается подкожно животному, а затем дозу каждый день в течение двух дней.
Зверь перемещается в теплую выздоравливающие клетки. Зверь находится в сознании в течение 30-40 минут и начинает двигаться. Оперированное животное находится в изоляции до полного заживления хирургических ран, что может занять от трех до четырех дней.
Для индуцирования ALF, 750 миллиграмм на кг массы тела ацетаминофен и вторая доза мелоксикам вводится интраперитонально 24 часов после частичной процедуры гепатэктомии. Этот режим дозы повторяется через 24 часа. После индукции ALF, выживаемость у животных было установлено, что серьезно снижается.
Чтобы охарактеризовать развитие ALF, оперированные животные были усыплены после второй дозы ацетаминофена, и были проведены различные биохимические и гистологические исследования. Результаты описаны впереди в видео. Процент выживаемости в индуцированной группе ALF был обнаружен серьезно снизился и до 80% смертности наблюдалось в течение 24 часов после второй дозы ацетаминофена.
Повреждение печени было очевидно на морфологическом уровне в индуцированной группе ALF и только 70%частичной гепатэктомии группы. В то время как контрольная группа и только ацетаминофен лечение группы имели здоровый внешний вид. Уровни ферментов аланиновой аминокислотной трансферазы, аспартатной амино-трансферазы и щелочной фосфатазы были обнаружены в группе ALF, вызванной аспартатом, по сравнению с другими группами.
Анализ профиля экспрессии генов по qPCR показал повышенную экспрессию генов, участвующих в апоптозе, воспалении и прогрессировании травмы печени. Гематоксилин и эозин окрашивание секций тканей печени выявили в основном нормальные гепатоциты в контрольной группе. В группе ALF наблюдалась в основном умеренная макро-везикулярная жировая дегенерация.
Протромбин времени и международного нормализованного соотношения были обнаружены повышенные в ALF индуцированной группы, что свидетельствует о затруднении процесса свертывания крови. Процент выживаемости был обнаружен восстановлен в индуцированной группой ALF после трансплантации сингенеических здоровых гепатоцитов крыс. Уровни сыворотки ферментов аланина амино трансферазы, аспарта аминокислот трансферазы и щелочной фосфатазы были найдены, чтобы быть восстановлены в ALF индуцированных животных после трансплантации клеток.
Этот метод индуцирования ALF у крыс воспроизводится, показывает хорошую обратимость и обеспечивает подходящее время для тестирования новых методов лечения. Таким образом, эта модель может служить эффективной моделью болезни для оценки потенциальных терапевтических подходов к лечению ALF.
