Этот протокол измеряет фотосинтетическую активность прикрепленных водорослей, в то время как они все еще прикрепляются к планктону, как и в природе. Основным преимуществом этого метода является то, что измерение фотофизиологии может быть выполнено в режиме реального времени без отвлечения образца. Чтобы изучить влияние особей зоопланктона на базовую флуоресценцию, приготовьте взрослую scapholeberis mucronata из культуры без каких-либо прикрепленных организмов.
Теперь голодайте людей в FLW при 20 градусах Цельсия в течение не менее 90 минут, чтобы избежать флуоресценции от содержимого кишечника. Налейте 1,5 миллилитра FWL в кювету. Подберите нужное количество с.
Мукронаты особей используют пипетку под оптическим микроскопом при 100-кратном увеличении и переносят их в кювету. Добавьте FLW, чтобы довести объем образца до 2-миллилитров и позволить ему акклиматизироваться при слабом освещении при 20 градусах Цельсия за 15 минут до быстрого измерения частоты повторения флуорометра. Затем нажмите «Действовать, чтобы запустить», чтобы начать измерение и повторить измерения более трех раз на образец.
Считывание значения F0 с результирующего графика. Подберите виды колациума линькой панцирем с помощью пипетки под оптическим микроскопом при 100-кратном увеличении и промыть их FLW. Асептически инокулируют виды колациума в среде AF-6 в 10-миллилитровой стеклянной трубке на чистом стенде.
Поддерживайте культуру при температуре NC2 в камере роста, осторожно встряхивая стеклянную трубку вручную, по крайней мере, один раз в день, чтобы предотвратить осаждение клеток. Чтобы изучить влияние особей зоопланктона на флуоресценцию хлорофилла из видов colacium, используйте взрослую s. mucronata без каких-либо прикрепленных организмов.
Чтобы избежать флуоресценции содержимого кишечника, голодайте людей в FLW в течение не менее 90 минут. Установите флуорометр с быстрой частотой повторения типа кюветы. Теперь налейте 1,5 миллилитра субобразца предварительно культивируемых видов колациума в кювету.
Затем переведите нужное количество особей s. mucronata в эти кюветы и доведите объем образца до 2-миллилитров с фильтрованной средой. Акклиматизируйте людей при слабом освещении при 20 градусах Цельсия в течение 15 минут, прежде чем проводить быстрое измерение частоты повторений флуорометра.
Нажмите на акт, чтобы запустить», чтобы начать измерение, повторяя измерения более трех раз на образец. Считывание значений F0 и FM с результирующего графика. Чтобы скорректировать базовую флуоресценцию, фильтруйте культуральную среду с помощью фильтра размером 0,2 микрометра и измеряйте флуоресценцию.
Вычтите F0 исходного образца из F0 и FM видов колация или измените значение пустой коррекции в настройках на вкладке опций. Изолируйте особей s. mucronata с видами colacium с помощью пипетки под оптическим микроскопом.
Затем промыть s. mucronata с помощью FLW. Трансфер с.
мукронаты вводят в 100-миллилитры FLW и сохраняют их в темных условиях при температуре NC2 в течение 90 минут для голодания. Налейте 1,5 миллилитра FLW в кювету. Перевод около десяти с.
Особи мукроната с видами colacium в кювету и добавляют FLW, чтобы довести образец до 2-миллилитров. Акклиматизируйте особей при слабом освещении при температуре N2C в течение 15 минут и измеряйте флуоресценцию хлорофилла, как указано в тексте рукописи. Чтобы перечислить количество прикрепленных клеток, зафиксируйте образец с 2% глутаровым альдегидом после измерения скорости быстрого повторения флуорометра.
Затем делайте снимки на нескольких фокусных глубинах и положениях s. mucronata под световым микроскопом. Не было выявлено значимого влияния на исходную флуоресценцию или флуоресценцию хлорофилла a по s.
мукроната до 5 особей на миллилитр. Однако максимальная фотохимическая эффективность и нефотохимическая тушение были значительно затронуты, когда плотность s. mucronata составляла 7,5 особей на миллилитр.
Сезонные изменения в фитофизиологии видов колациума на стадии присоединения и планктонной стадии для стационарной фазы в среде AF-6 показали сходную среднюю максимальную фотохимическую эффективность и нефотохимическое закалку. Для присоединенной стадии видов колациума в темных условиях не было выявлено существенной разницы в фотофизиологических параметрах, за исключением того, что нефотохимическое закалка для марганца выше, чем кальций через три часа, и при низкой интенсивности света через 21 час. Для планктонной стадии поперечное сечение поглощения PS2 было значительно ниже в марганце, чем обработка кальцием через три часа.
Эффективная фотохимическая эффективность была значительно выше, но нефотохимическая закалка была ниже при обработке марганцем, чем контрольная через 21 час. При увеличении света марганец, как правило, уменьшал поперечное сечение поглощения PS2 через три часа, при нефотохимическом закалке через 21 час, одновременно увеличивая эффективную фотохимическую эффективность через три часа. Кальций незначительно улучшал нефотохимическое гашение при увеличении света.
Однако это снизило эффективную фотохимическую эффективность через три часа. Самое главное – это действие субстратных организмов. Если водоросли прикреплены к разным видам или материалам, эффект может быть разным.
В дополнение к этому протоколу, измерение фиксации углерода или скорости производства кислорода полезно для уточнения реакции продуктивности кальция на экспериментальные манипуляции. Этот протокол позволяет уточнить, как фотосинтетическая активность прикрепленных водорослей реагирует на изменения окружающей среды.
